發(fā)布時間：2017-10-22 01:07

  本文關鍵詞：α1-Giardin的原核表達與多克隆抗體制備

  更多相關文章： 藍氏賈第鞭毛蟲 α-賈第素 原核表達 多克隆抗體

【摘要】：目的原核表達α1-Giardin并制備兔抗rα1-Giardin多克隆抗體。方法以藍氏賈第鞭毛蟲DNA為模板,PCR擴增α1-giardin編碼基因片段,經雙酶切后連入原核表達載體pET-41a(+),構建重組表達載體pET-41a(+)-α1-giardin,熱激法轉化大腸埃希菌E.coli BL21(DE3),經IPTG誘導后收集菌體并裂解,采用SDS-PAGE檢測目的蛋白的表達,采用His-tag親和層析柱純化融合蛋白。將α1-Giardin蛋白與等體積弗氏完全佐劑乳化后免疫新西蘭白兔,隔周以同樣劑量蛋白加等體積弗氏不完全佐劑加強免疫2次。末次免疫后一周頸動脈取血,制備多抗血清,采用間接ELISA法測定抗體效價。結果成功構建原核表達載體pET-41a(+)-α1-giardin,轉化大腸埃希菌后經IPTG誘導表達分子質量單位為34.8ku的可溶性蛋白;經His-tag親和層析柱純化獲得高純度的重組α1-giardin蛋白,制備的免疫兔抗血清ELISA滴度為1∶51 200。結論成功克隆、表達并純化了賈第蟲α1-giardin蛋白,制備了高滴度的抗α1-giardin多克隆兔血清,為以α1-Giardin為抗原的疫苗研究奠定了基礎。
【作者單位】： 吉林醫(yī)藥學院;
【關鍵詞】： 藍氏賈第鞭毛蟲 α-賈第素 原核表達 多克隆抗體
【基金】：國家自然科學基金項目(No.81301450,31572262) 吉林省科技廳國際合作項目(No.20160414050GH) 吉林市杰出青年基金項目(No.201464037)
【分類號】：R382.2;R3416
【正文快照】： ***藍氏賈第鞭毛蟲(Giardia lamblia)簡稱賈第蟲,主要寄生于人和多種哺乳動物的小腸,可導致腹瀉、營養(yǎng)吸收不良綜合征及兒童生長障礙[1-5]。賈第蟲細胞骨架的特有成分為賈第素,與賈第蟲的致病性密切相關。賈第素分為4大類,即α、β、γ和δ-賈第素(giardin),α-giardin是最大

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本文編號：1076044