本文關(guān)鍵詞：人源骨架蛋白FN3展示腦鈉肽前體N端抗原表位研究

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【摘要】：目的·應(yīng)用人源骨架蛋白FN3展示腦鈉肽前體N端(NT-proBNP)抗原表位,采用大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)高效表達(dá)具有腦鈉肽前體N端抗原表位活性的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定的重組蛋白。方法·將編碼腦鈉肽前體N端第12~21位和第13~20位氨基酸殘基的抗原表位序列分別取代骨架蛋白FN3 FG loop區(qū),并克隆到大腸桿菌表達(dá)載體pET28(a)+上,由大腸桿菌BL21(DE3)plySs表達(dá)后純化,檢測(cè)其抗原活性并進(jìn)行理化性質(zhì)分析。結(jié)果·成功構(gòu)建骨架蛋白FN3展示腦鈉肽前體第12~21位和第13~20位氨基酸殘基抗原表位的表達(dá)載體,獲得高效表達(dá)骨架蛋白FN3展示腦鈉肽前體N端抗原表位的大腸桿菌表達(dá)菌株。鎳柱純化后獲得高純度重組蛋白,經(jīng)Western blotting與ELISA鑒定具有腦鈉肽前體N端抗原免疫活性。通過(guò)差式熱量掃描法檢測(cè)顯示重組蛋白保持FN3骨架蛋白原有結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性;血漿穩(wěn)定性檢測(cè)顯示重組蛋白是與抗原蛋白等效的高穩(wěn)定的抗原蛋白替代物,可明顯延長(zhǎng)降解周期(血漿半衰期)。結(jié)論·成功利用了FN3骨架蛋白展示腦鈉肽N端前體,采用大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)可以簡(jiǎn)單、快速、高效制備具有與腦鈉肽前體的抗原性相當(dāng)?shù)哪X鈉肽前體抗原替代物。
【作者單位】： 大連大學(xué)醫(yī)學(xué)院人體解剖學(xué)教研室;大連大學(xué)醫(yī)學(xué)研究中心;
【關(guān)鍵詞】： 骨架蛋白 腦鈉肽前體 表位展示
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(31370937)~~
【分類號(hào)】：R392
【正文快照】： 腦鈉肽(brain natriuretic peptide,BNP)是利鈉肽家族成員之一,又稱B型利鈉肽(B-type natriuretic peptide,BNP),具有利鈉排水的作用。在心臟負(fù)荷加重時(shí),由心肌細(xì)胞分泌的BNP可有效抑制腎素一血管緊張素一酸固酮系統(tǒng),擴(kuò)張血管,改善心功能。臨宋研究1151表明,BNP是反映心臟功能

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本文編號(hào)：1068066