本文關(guān)鍵詞：乙型腦炎減毒活疫苗中豬圓環(huán)病毒PCR檢測方法的建立及驗證

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【摘要】：目的建立乙型腦炎減毒活疫苗中豬圓環(huán)病毒1型(porcine circovirus 1,PCV1)和豬圓環(huán)病毒2型(PCV2)PCR檢測方法,并進行驗證及初步應(yīng)用。方法參照Gen Bank中登錄的PCV1(AY193712)及PCV2序列(AY181946)設(shè)計引物,以提取的PCV1和PCV2基因組DNA為模板,分別經(jīng)PCR擴增726 bp的PCV1片段和433 bp的PCV2片段,并對PCR反應(yīng)中的退火溫度、引物濃度、Mg2+濃度參數(shù)進行優(yōu)化。將PCR擴增產(chǎn)物分別與p MD18-T載體連接,連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化感受態(tài)大腸埃希菌DH5α,挑取陽性克隆,測序并進行同源性分析。對優(yōu)化的PCR方法進行靈敏度和特異性驗證,并用該方法檢測3批乙型腦炎減毒活疫苗工作種子批、4批明膠和10批胰蛋白酶中的PCV1和PCV2。結(jié)果確定PCR反應(yīng)的退火溫度為54℃,引物濃度為10μmol/L,Mg2+濃度為10 mmol"L。擴增的目的基因測序結(jié)果與Gen Bank中發(fā)布的PCV1及PCV2序列的同源性均為100%。建立的PCR方法最低可檢出10 pg的目的基因;該方法只對PCV1和PCV2基因組DNA能擴增出特異性條帶。用該方法檢測乙型腦炎減毒活疫苗工作種子批、明膠和胰蛋白酶,均未檢出PCV1和PCV2。結(jié)論成功建立了乙型腦炎減毒活疫苗中PCV1和PCV2的PCR檢測方法,該方法具有較高的靈敏度和較強的特異性,可用于乙型腦炎減毒活疫苗工作種子批及兩種豬源性原材料的PCV1和PCV2污染檢測。
【作者單位】： 成都生物制品研究所有限責任公司;
【關(guān)鍵詞】： 乙型腦炎減毒活疫苗 豬圓環(huán)病毒型 豬圓環(huán)病毒型 聚合酶鏈反應(yīng)
【分類號】：R392-33
【正文快照】： 流行性乙型腦炎(簡稱乙腦)是由乙型腦炎病毒引起的一種人類神經(jīng)系統(tǒng)疾病,據(jù)世界衛(wèi)生組織(WHO)統(tǒng)計,全球每年至少有30%的乙型腦炎病毒感染者會導(dǎo)致永久性的神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥[1]。目前接種乙型腦炎減毒活疫苗在預(yù)防控制該疾病的流行中發(fā)揮重要作用[2]。豬圓環(huán)病毒(porcine circovi

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1 甘一迪;王銀銀;任芳麗;張旭;田碩;張誠;;培養(yǎng)細胞污染支原體的PCR檢測方法的建立及應(yīng)用[J];中國醫(yī)藥生物技術(shù);2011年04期

2 周建嫦,張建中,徐采樸,何利華,張茂俊,盛濤,郭浩巖;幽門螺桿菌cagA基因PCR檢測方法初探[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2001年10期

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中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 王花茹;豬鏈球菌PCR檢測方法的建立及纖連蛋白結(jié)合蛋白的克隆和表達[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2006年

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本文編號：1059389