本文關(guān)鍵詞：人鈣結(jié)合蛋白S100A9基因克隆表達(dá)純化及其對(duì)SH-SY5Y細(xì)胞作用的研究

  更多相關(guān)文章： SA 重組質(zhì)粒 蛋白表達(dá) SH-SYY 凋亡

【摘要】：鈣結(jié)合蛋白S100A9在許多慢性疾病中聚集并可能在一些自身免疫性如老年癡呆中發(fā)揮了重要的作用。大量的報(bào)道也表明S100A9日益獲得人們的注意。通過(guò)獲取足量重組人S100A9蛋白,探索其對(duì)神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞SH-SY5Y的作用及機(jī)制。運(yùn)用全基因合成法合成人S100A9基因,構(gòu)建人S100A9原核表達(dá)重組質(zhì)粒p ET28a-S100A9,經(jīng)單酶切法及PCR法鑒定重組質(zhì)粒已構(gòu)建成功。利用異丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)在18℃、25℃、37℃分別誘導(dǎo)表達(dá),經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)和Western blotting鑒定,結(jié)果顯示18℃時(shí)蛋白大量表達(dá)于上清中,在37℃時(shí)大量表達(dá)于包涵體。采用鎳親和層析法分別純化兩種來(lái)源重組蛋白,透析后低溫凍干獲得蛋白粉。使用CCK-8法檢測(cè)上清來(lái)源和包涵體來(lái)源的S100A9蛋白對(duì)神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞SH-SY5Y的增殖抑制作用。結(jié)果顯示兩種來(lái)源重組蛋白對(duì)SH-SY5Y細(xì)胞具有生長(zhǎng)抑制作用,在濃度為0.05 mg/m L時(shí)即有明顯抑制作用(p0.01),且二者作用無(wú)明顯差異(p0.01)。采用AO/EB雙重染色和流式細(xì)胞術(shù)初步檢測(cè)S100A9對(duì)SH-SY5Y細(xì)胞的增殖抑制機(jī)理,結(jié)果顯示該蛋白可促進(jìn)SH-SY5Y細(xì)胞的凋亡。兩種來(lái)源蛋白之間的比較也顯示二者對(duì)于SH-SY5Y細(xì)胞作用無(wú)明顯差異(p0.05)。本研究成功獲得足量S100A9重組蛋白,且兩種來(lái)源S100A9蛋白作用于SH-SY5Y細(xì)胞的生物學(xué)效應(yīng)一致。
【作者單位】： 重慶醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院組織細(xì)胞工程與干細(xì)胞研究室分子醫(yī)學(xué)與腫瘤研究中心藥物化學(xué)實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： SA 重組質(zhì)粒 蛋白表達(dá) SH-SYY 凋亡
【基金】：重慶市基礎(chǔ)與前沿研究計(jì)劃項(xiàng)目(cstc2015jcyjA10034)資助
【分類(lèi)號(hào)】：R3416
【正文快照】： *通訊作者,454165592@qq.comHuman Calcium Binding Protein S100A9 Gene Cloning Expression withPurified and Study the Role of SH-SY5Y CellYe Liu Li Zhao Chen Zhenyin Liu Duqiang Liao Jianmei Chen Xiongbin Xiong Wei Liu ZhaoyuXiong Lirong Li Jing Huang Qin Li

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本文編號(hào)：1052239