發(fā)布時(shí)間：2017-10-16 07:49

  本文關(guān)鍵詞：EV71-2A突變質(zhì)粒的構(gòu)建及體內(nèi)外功能初探

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【摘要】：目的構(gòu)建pc DNA3.1-EV71-2A的突變質(zhì)粒(EV71-2Amut),并對(duì)其功能進(jìn)行檢測(cè),為進(jìn)一步研究腸道病毒71型(Enterovirus type 71,EV71)2A蛋白酶的活性位點(diǎn)及其生物學(xué)功能奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。方法利用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)定點(diǎn)誘變技術(shù),定點(diǎn)突變編碼EV71-2A第21His、39Asp和110Cys氨基酸的位點(diǎn),構(gòu)建EV71-2Amut,并測(cè)序鑒定。將所構(gòu)建突變質(zhì)粒與巨細(xì)胞病毒(Cytomegalovirus,CMV)啟動(dòng)子介導(dǎo)的真核細(xì)胞熒光素酶報(bào)告基因(pRL-CMV)共轉(zhuǎn)染人橫紋肌肉瘤細(xì)胞(RD細(xì)胞),通過(guò)觀(guān)察轉(zhuǎn)染組的EV71-2Apro和EV71-2Amut對(duì)pRL-CMV熒光強(qiáng)度的影響,判斷突變質(zhì)粒的細(xì)胞內(nèi)酶活性。將EV71-2Apro或EV71-2Amut質(zhì)粒轉(zhuǎn)染BALB/c小鼠股四頭肌,用RT-PCR檢測(cè)局部相應(yīng)質(zhì)粒的mRNA水平,并觀(guān)察局部肌肉組織的病理變化。結(jié)果構(gòu)建的突變質(zhì)粒EV71-2Amut經(jīng)測(cè)序及比對(duì),結(jié)果與預(yù)計(jì)突變位點(diǎn)一致;在細(xì)胞學(xué)水平檢測(cè)到的pRL-CMV熒光強(qiáng)度,EV71-2Amut組比EV71-2Apro組顯著增高(P0.05);小鼠股四頭肌注射局部均檢出EV71-2Apro和EV71-2Amut的mRNA表達(dá),且與EV71-2Apro組相比,EV71-2Amut注射組的肌肉組織的肌肉凝固性壞死、炎癥反應(yīng)病理?yè)p傷較輕。結(jié)論成功構(gòu)建了突變的EV71-2Amut質(zhì)粒,為研究EV71-2A蛋白酶的生物學(xué)功能奠定了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
【作者單位】： 北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)系;山西醫(yī)科大學(xué)汾陽(yáng)學(xué)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)系病原生物學(xué)教研室;
【關(guān)鍵詞】： 腸道病毒型 突變質(zhì)粒 構(gòu)建 序列分析 生物學(xué)效應(yīng)
【分類(lèi)號(hào)】：R373
【正文快照】： 腸道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)是引起手足口病的重要病原體。幾十年來(lái)該病在亞太地區(qū)廣泛流行,尤其在中國(guó)大陸和臺(tái)灣地區(qū)。大多數(shù)患者癥狀輕微,主要以發(fā)熱,手、足及口腔黏膜等部位皰疹為特征;少數(shù)嚴(yán)重患者還出現(xiàn)腦炎、無(wú)菌性腦膜炎、神經(jīng)源性肺水腫等癥狀,甚至可致嬰幼兒，

本文編號(hào)：1041483