本文關(guān)鍵詞：豬帶絳蟲絲氨酸蛋白酶抑制劑B6基因的鑒定、表達(dá)及抗原性分析

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【摘要】：目的鑒定、表達(dá)豬帶絳蟲(Taenia solium)絲氨酸蛋白酶抑制劑(Tsserpin B6),探索其作為診斷抗原的可行性。方法利用豬帶絳蟲基因組和轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)設(shè)計(jì)Tsserpin B6特異引物,RT-PCR擴(kuò)增獲得Tsserpin B6基因,對(duì)其DNA、氨基酸序列進(jìn)行生物信息學(xué)分析,利用Clustal X1.83進(jìn)行序列比對(duì),并用MEGA6.0進(jìn)行系統(tǒng)進(jìn)化分析。構(gòu)建pET-30a-Tsserpin B6重組表達(dá)載體,在大腸埃希菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中誘導(dǎo)表達(dá)。純化表達(dá)的蛋白進(jìn)行十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE),用豬囊尾蚴陽(yáng)性血清進(jìn)行蛋白質(zhì)印跡(Western blotting)鑒定。結(jié)果Tsserpin B6開(kāi)放閱讀框?yàn)? 131 bp,編碼376個(gè)氨基酸。其編碼的氨基酸序列具有serpin較為保守的反應(yīng)中心環(huán)和特征性結(jié)構(gòu)域(NEEGAE和FTVDHPFLF),存在9個(gè)潛在的線性B淋巴細(xì)胞抗原表位。Tsserpin B6的表達(dá)產(chǎn)物相對(duì)分子質(zhì)量(M_r)為53 000,主要以包涵體形式存在。Western blotting檢測(cè)結(jié)果顯示,所表達(dá)的蛋白可與豬囊尾蚴陽(yáng)性血清發(fā)生特異性反應(yīng),在M_r 53 000處產(chǎn)生特異條帶。結(jié)論克隆了Tsserpin B6基因,其表達(dá)產(chǎn)物能被豬囊尾蚴陽(yáng)性血清所識(shí)別。
【作者單位】： 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所 家畜疫病病原生物學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 甘肅省動(dòng)物寄生蟲病重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;江蘇省動(dòng)物重要疫病與人獸共患病防控協(xié)同創(chuàng)新中心;
【關(guān)鍵詞】： 豬帶絳蟲 Tsserpin B 鑒定 表達(dá) 抗原性分析
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(No.31372433)~~
【分類號(hào)】：R383.32
【正文快照】： (1 State Key Laboratory of Veterinary Etiological Biology,Key Laboratory of Veterinary Parasitology ofGansu Province,Lanzhou Veterinary Research Institute,Chinese Academy of Agricultural Sciences,Lanzhou 730046,China;2 Jiangsu Co-innovation Center for Pr

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