本文關(guān)鍵詞：整合子相關(guān)元件多重PCR檢測(cè)技術(shù)建立及其在弧菌中應(yīng)用

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【摘要】：為了建立一種能同時(shí)檢測(cè)1類(lèi)整合子、4類(lèi)超級(jí)整合子和1型插入序列共同區(qū)的多重PCR檢測(cè)方法,根據(jù)Gen Bank中1類(lèi)整合子整合酶基因int1、4類(lèi)超級(jí)整合子整合酶基因intSXT和1型插入序列共同區(qū)轉(zhuǎn)座酶基因ISCR1的序列,應(yīng)用Primer Plex 2.61設(shè)計(jì)3對(duì)特異性引物,通過(guò)改變引物濃度和退火溫度對(duì)多重PCR體系進(jìn)行了優(yōu)化。此后,評(píng)價(jià)了所建立多重PCR體系的特異性和靈敏度,并應(yīng)用于222株海水養(yǎng)殖源弧菌中3種整合子相關(guān)元件的檢測(cè)。結(jié)果顯示,設(shè)計(jì)的3對(duì)引物能分別單獨(dú)且特異性地?cái)U(kuò)增出569 bp、430 bp和651 bp的目的條帶;當(dāng)int1、intSXT和ISCR13對(duì)引物(10 pmol/μL)的體積依次為0.3μL、0.6μL和0.6μL,退火溫度為50℃時(shí),多重PCR體系能特異性地?cái)U(kuò)增出3個(gè)條帶清晰、區(qū)分度良好的目的條帶,方法的靈敏度達(dá)到0.02 ng/μL弧菌基因組模板DNA;利用所建立的方法對(duì)222株臨床分離弧菌進(jìn)行3種整合子元件檢測(cè)得到的結(jié)果與文獻(xiàn)報(bào)道的單引物檢測(cè)結(jié)果一致。從上述研究結(jié)果可以看出,該多重PCR方法能快速準(zhǔn)確地檢測(cè)Int1、SXT和ISCR1,適用于整合子相關(guān)元件流行監(jiān)測(cè)及整合子相關(guān)的耐藥性研究。
【作者單位】： 中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院東海水產(chǎn)研究所農(nóng)業(yè)部海洋與河口漁業(yè)資源及生態(tài)重點(diǎn)開(kāi)放實(shí)驗(yàn)室;上海海洋大學(xué)水產(chǎn)與生命學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 多重PCR 整合子 SXT ISCR 弧菌
【基金】：上海市科技興農(nóng)重點(diǎn)攻關(guān)項(xiàng)目(滬農(nóng)科攻字〔2014〕第3-4號(hào)) 中央級(jí)公益性科研院所基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)專(zhuān)項(xiàng)(東海水產(chǎn)研究所L-2015-1602)
【分類(lèi)號(hào)】：R378
【正文快照】： 抗生素的發(fā)現(xiàn)和應(yīng)用拯救了數(shù)十億人的生命,同時(shí)也推動(dòng)了陸生和水生動(dòng)物養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展。隨著抗菌藥物在人類(lèi)醫(yī)學(xué)臨床尤其是在食品動(dòng)物養(yǎng)殖中的廣泛使用,細(xì)菌耐藥性問(wèn)題日趨嚴(yán)重。整合子是介導(dǎo)革蘭氏陰性菌抗菌藥物耐藥產(chǎn)生和迅速傳播的重要機(jī)制之一[1]。它是細(xì)菌的一種天然的克

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

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10 陳國(guó)忠;汪一萍;安敏飛;應(yīng)建飛;俞燕紅;周成杰;賀明陽(yáng);;鮑氏不動(dòng)桿菌新形整合子,Ⅰ類(lèi)整合子遺傳標(biāo)記研究[A];第三屆重癥醫(yī)學(xué)大會(huì)論文匯編[C];2009年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

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3 朱靜媛;志賀菌屬細(xì)菌整合子與多重耐藥性研究[D];鄭州大學(xué);2010年

4 鄧笑偉;嗜麥芽窄食單胞菌的耐藥性與整合子關(guān)系的研究[D];中國(guó)人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2007年

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6 孫光明;整合子介導(dǎo)銅綠假單胞菌獲得性耐藥機(jī)制的研究[D];江蘇大學(xué);2013年

7 魏取好;細(xì)菌整合子捕獲與表達(dá)耐藥性基因盒調(diào)控機(jī)制的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2010年

8 夏蕊蕊;山東省濟(jì)南市區(qū)廢水環(huán)境中整合子細(xì)菌篩選及耐藥性機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2010年

9 李詠梅;腸出血性及產(chǎn)志賀樣毒素大腸埃希菌耐藥機(jī)制的研究[D];吉林大學(xué);2004年

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中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 張鳳岐;Intl-ISCR1-qnrB多重PCR方法的建立及臨床應(yīng)用[D];鄭州大學(xué);2015年

2 喬霞;整合子在表皮葡萄球菌中的分布及苦參堿對(duì)Ⅰ類(lèi)整合酶基因表達(dá)量影響的研究[D];寧夏大學(xué);2015年

3 歐陽(yáng)潤(rùn)澤;水環(huán)境細(xì)菌Ⅰ型整合子整合酶基因與基因盒陣列調(diào)控的研究[D];山東大學(xué);2015年

4 王s，

本文編號(hào)：1014592