本文關(guān)鍵詞：口腔內(nèi)科學(xué)論文，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。
復(fù)發(fā)性口腔潰瘍口腔微生態(tài)的研究
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本站編輯：admin 日期： 2010-09-28 23:12 點(diǎn)擊：次
【中文摘要】:
相關(guān)口腔內(nèi)科學(xué)論文
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口腔鱗狀細(xì)胞癌中S100A4蛋白和上皮鈣粘
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【中文摘要】研究背景、目的和意義復(fù)發(fā)性口腔潰瘍(Recurrent Oral Ulcer,ROU),又稱“復(fù)發(fā)性口瘡”、“復(fù)發(fā)性阿弗他潰瘍”(Recurrent Aphthous Ulcer,RAU)或“復(fù)發(fā)性阿弗他口炎”(Recurrent Aphthous Stomatitis,RAS),是專指一類原因不明,具有周期性反復(fù)發(fā)作但又具自限性的局限性口腔粘膜潰瘍性損傷。該病是口腔粘膜病中最常見(jiàn)的潰瘍類疾病,患病率高達(dá)20%左右,居口腔粘膜病首位。復(fù)發(fā)性口腔潰瘍發(fā)病時(shí)病變部疼痛劇烈,對(duì)患者工作與生活造成重要影響。臨床尚無(wú)明確有效的治療方法。因此,ROU的病因及發(fā)病機(jī)制研究對(duì)進(jìn)一步的臨床治療研究具有重要作用。本病病因至今不清,多方面的病因研究表明,ROU的發(fā)生發(fā)展可能與多種因素有關(guān)。國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)已報(bào)道的病因方面的研究包括免疫學(xué)異常,病毒、細(xì)菌感染,微量元素、精神神經(jīng)因素、遺傳因素影響及微循環(huán)障礙等,但尚無(wú)確切定論。正常人體的口腔、腸道、呼吸道、泌尿生殖道等,均定植一定數(shù)量的細(xì)菌,它們與宿主在長(zhǎng)期進(jìn)化過(guò)程中形成了一個(gè)能獨(dú)立進(jìn)行物質(zhì)、能量交流的動(dòng)態(tài)平衡的微生態(tài)系統(tǒng)。定居于口腔中的菌群稱為口腔正常菌群,它與宿主呈共棲的關(guān)系,他們彼此之間保持著動(dòng)態(tài)平衡,對(duì)宿主起著有益和有害的雙重作用�？谇恢械募�(xì)菌,在正常情況下對(duì)宿主有多種有益的生理作用:如抵抗外來(lái)致病菌、產(chǎn)生多種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、促進(jìn)免疫應(yīng)答、產(chǎn)生過(guò)氧化物歧化酶(SOD)、清除自由基(O_2~-)及抗腫瘤等作用。一旦微生態(tài)平衡遭到破壞,發(fā)生菌群失調(diào),上述生理作用發(fā)生改變,對(duì)宿主可能造成損傷。有學(xué)者提出ROU的發(fā)生發(fā)展可能與多因素相互作用有關(guān)。多方面的病因研究表明,ROU的發(fā)生發(fā)展可能與多種因素有關(guān)�？谇粌�(nèi)環(huán)境與這些因素有著密切的關(guān)系。那么,ROU的發(fā)生發(fā)展是否與口腔的微生態(tài)相關(guān)呢?ROU患者口腔微生態(tài)是否發(fā)生了變化?又是哪些方面發(fā)生變化?本研究將從口腔菌群變化及口腔菌群構(gòu)成的角度,探討復(fù)發(fā)性口腔潰瘍是否與口腔微生態(tài)變化有關(guān),為口腔潰瘍的防治探索新的依據(jù)。材料和方法一、唾液菌群涂片觀察收集臨床唾液標(biāo)本共62例。將其分為潰瘍組、愈合組及正常對(duì)照組三組。潰瘍組為臨床確診并處于潰瘍期的20例ROU患者,其中男性6例,女性14例,平均年齡24.7±3.13歲;愈合組為臨床確診并處于愈合期的21例ROU患者,其中男性9例,女性12例,平均年齡25.9±6.67歲;對(duì)照組為無(wú)ROU病史的21位健康成年人,其中男性9例,女性12例,平均年齡23.3±2.27歲。所有受試者均符合以下納入標(biāo)準(zhǔn):所有受檢查者取樣前1周內(nèi)未服用任何抗生素、鉍劑、抗酸劑及H_2受體拮抗劑,1月內(nèi)未服用類固醇藥物或非類固醇類抗炎藥,如阿司匹林等;無(wú)其他系統(tǒng)疾病;無(wú)其他口腔黏膜病:無(wú)中、重度牙周病。方法:唾液標(biāo)本直接涂片,革蘭氏染色,在顯微鏡10×100油鏡下,選取分布均勻的5個(gè)視野,分別計(jì)數(shù)各視野下細(xì)菌中革蘭氏陽(yáng)性球菌(簡(jiǎn)稱G~+c)、革蘭氏陰性球菌(簡(jiǎn)稱G~-c)、革蘭氏陽(yáng)性桿菌(簡(jiǎn)稱G~+b)、革蘭氏陰性桿菌(簡(jiǎn)稱G~-b)所占的構(gòu)成比,然后求其均值。分析了不同菌群間的比值及構(gòu)成比的變化。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件,對(duì)不同組別四類細(xì)菌的構(gòu)成比及不同菌群間的比值采用單因素方差分析(One-way ANOVA),采用Dunnett T3法進(jìn)行兩兩比較,以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。二、復(fù)發(fā)性口腔潰瘍口腔唾液中鏈球菌、韋榮氏菌及奈瑟氏菌的定量分析收集符合納入標(biāo)準(zhǔn)的臨床標(biāo)本,共95例。納入標(biāo)準(zhǔn)參考第一章。將其分為潰瘍組、愈合組及正常對(duì)照組三組。潰瘍組為臨床確診并處于潰瘍期的39例ROU患者,其中男性13例,女性26例,平均年齡26.3±7.76歲;愈合組為臨床確診并處于愈合期的35例ROU患者,其中男性11例,女性24例,平均年齡25.3±5.47歲;對(duì)照組為無(wú)ROU病史的21位健康成年人,其中男性9例,女性12例,平均年齡23.3±2.27歲。方法:用引物設(shè)計(jì)軟件Primerprimer 5.0設(shè)計(jì)三種常見(jiàn)口腔細(xì)菌(鏈球菌、韋榮氏菌及奈瑟氏菌)16S rRNA基因擴(kuò)增引物,并驗(yàn)證其特異性;采用改良CTAB/NaCl法提取細(xì)菌標(biāo)本DNA;通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)鏈球菌、韋榮氏菌及奈瑟氏菌三種常見(jiàn)口腔細(xì)菌的含量。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件,對(duì)不同組別三種細(xì)菌的含量采用單向方差分析(One-way ANOVA),采用Dunnett T3法進(jìn)行兩兩比較,以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。三、基于細(xì)菌16S rRNA基因分析的復(fù)發(fā)性口腔潰瘍口腔細(xì)菌構(gòu)成差異分析分別收集符合納入標(biāo)準(zhǔn)的唾液標(biāo)本30例,納入標(biāo)準(zhǔn)參考第一章。將其分為潰瘍組、愈合組及正常對(duì)照組三組,每組10例。潰瘍組為臨床確診并處于潰瘍期的ROU患者;愈合組為臨床確診并處于愈合期的ROU患者;對(duì)照組為無(wú)ROU病史的健康成年人。方法:采用改良CTAB/NaCl法提取細(xì)菌標(biāo)本DNA,并且制備成混合標(biāo)本。用細(xì)菌16S rRNA通用引物擴(kuò)增混合標(biāo)本,瓊脂糖凝膠電泳,用AlphaEaseFCStand Alone軟件行凝膠圖像分析。選擇回收純化差異較明顯的條帶,測(cè)定片段序列并在GenBank中比對(duì),分析差異條帶的種屬源性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果一、唾液菌群涂片觀察潰瘍組、愈合組及對(duì)照組G~+c構(gòu)成比分別為:45.16±6.99、43.38±6.92及42.96±4.69;G~+b構(gòu)成比分別為:3.95±3.12、3.04±1.38及2.65±1.71;G~-b構(gòu)成比分別為:4.94±2.43、3.79±2.16及4.35±2.96。潰瘍組、愈合組及對(duì)照組G~+c、G~+b及G~-b構(gòu)成比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.499、P=0.160、P=0.352)。潰瘍組、愈合組及對(duì)照組G~-c構(gòu)成比分別為:45.94±5.42、49.79±6.22及50.09±4.65;三組間G~-c構(gòu)成比差異具有顯著性(P=0.032);潰瘍組G~-c構(gòu)成比較愈合組及對(duì)照組分別下降了3.85及4.15個(gè)百分點(diǎn)。潰瘍組、愈合組及對(duì)照組球菌構(gòu)成比均在90%以上,三組總球菌的構(gòu)成比分別為:91.10±4.83、93.17±2.57及93.05±4.38;總桿菌的構(gòu)成比分別為:8.89±4.83、6.83±2.57及7.00±4.37。潰瘍組、愈合組及對(duì)照組總球菌及總桿菌構(gòu)成比差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.193、P=0.201)。潰瘍組、愈合組及對(duì)照組G~+c/G~-c比值分別為:1.00±0.26、0.90±0.26及0.87±0.16;G~+b/G~-b比值分別為:0.83±0.45、1.13±1.01及0.64±0.30;G~+c/G~+b比值分別為:17.51±13.55、18.08±11.02及24.20±15.93;G~-c/G~-b比值分別為:12.23±7.14、17.77±12.10及15.34±7.90。三組間G~+c/G~-c、G~+c/G~+b及G~-c/G~-b差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.140、P=0.224、P=0.172),G~+b/G~-b在三組間存在差異,P=0.063。潰瘍組、愈合組及對(duì)照組G~+c/(G~+c+G~+b)構(gòu)成比分別為:0.92±0.07、0.93±0.03、0.94±0.04;G~+b/(G~+c+G~+b)構(gòu)成比分別為:0.08±0.07、0.07±0.03、0.06±0.04;G~-c/(G~-c+G~-b)構(gòu)成比分別為:0.90±0.04、0.93±0.04、0.92±0.05;G~-b/(G~-c+G~-b)構(gòu)成比分別為:0.10±0.04、0.07±0.04、0.08±0.05;G~+c/(G~+c+G~-c)構(gòu)成比分別為:0.49±0.06、0.47±0.07、0.46±0.04;G~-c/(G~+c+G~-c)構(gòu)成比分別為:0.51±0.06、0.53±0.07、0.54±0.04;G~+b/(G~+b+G~-b)構(gòu)成比分別為:0.43±0.11、0.46±0.18、0.37±0.10;G~-b/(G~+b+G~-b)構(gòu)成比分別為:0.57±0.11、0.54±0.18、0.63±0.10。三組間G~+c/(G~+c+G~+b)、G~+b/(G~+c+G~+b)、G~-c/(G~-c+G~-b)、G~-b/(G~-c+G~-b)、G~+c/(G~+c+G~-c)、G~-c/(G~+c+G~-c)、G~+b/(G~+b+G~-b)、G~-b/(G~+b+G~-b)構(gòu)成比差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.302、P=0.302、P=0.162、P=0.162、P=0.166、P=0.166、P=0.117、P=0.117)。潰瘍組、愈合組及對(duì)照組G~+/G~-比值分別為:0.99±0.25、0.90±0.26、0.85±0.16;Gc/Gb比值分別為:13.85±8.53、15.73±6.60、17.85±9.88。三組間G~+/G~-、Gc/Gb差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.130、P=0.323)。二、復(fù)發(fā)性口腔潰瘍口腔唾液中鏈球菌、韋榮氏菌及奈瑟氏菌的定量分析潰瘍組鏈球菌及韋榮氏菌含量的對(duì)數(shù)值分別為7.30±0.89和8.29±0.77,均顯著低于對(duì)照組(8.15±0.55和8.93±0.76,P＜0.01),鏈球菌及韋榮氏菌含量分別較對(duì)照組降低了66%和86%;潰瘍組與愈合組間鏈球菌及韋榮氏菌的含量的對(duì)數(shù)值差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.64、P=0.17);愈合組鏈球菌含量的對(duì)數(shù)值為7.51±0.81,顯著低于對(duì)照組(8.15±0.55,P＜0.01),菌量較對(duì)照組降低67%,愈合組與對(duì)照組間韋榮氏菌含量的對(duì)數(shù)值差異統(tǒng)計(jì)結(jié)果P=0.056;奈瑟氏菌含量的對(duì)數(shù)值在三組間的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.921)。三、基于細(xì)菌16S rRNA基因分析的復(fù)發(fā)性口腔潰瘍口腔細(xì)菌構(gòu)成差異分析在200-800bp區(qū)間,于潰瘍組、愈合組及對(duì)照組均穩(wěn)定識(shí)別出3條堿基數(shù)分別為230bp、400bp及770bp左右的三條條帶。潰瘍組、愈合組及對(duì)照組三條條帶灰度值的百分比有差異。在潰瘍組、愈合組及對(duì)照組條帶組成方面存在差異,各組在不同位置均有條帶缺失現(xiàn)象。條帶綜合波形圖也反映了潰瘍組、愈合組及對(duì)照組在條帶含量構(gòu)成方面存在差異。選擇回收純化片段暫命名為1號(hào),片段大小約為180bp。測(cè)序結(jié)果通過(guò)生物信息學(xué)分析。1號(hào)blast比對(duì)結(jié)果示1號(hào)差異條帶70%與GenBank中Bacteroides vulqatus ATCC 8482同源,匹配率74%。結(jié)論1、潰瘍組、愈合組及對(duì)照組唾液菌群以球菌為主,潰瘍組革蘭氏陰性球菌構(gòu)成比減少,表明復(fù)發(fā)性口腔潰瘍唾液菌群構(gòu)成發(fā)生了變化。2、復(fù)發(fā)性口腔潰瘍患者唾液中鏈球菌、韋榮氏菌含量發(fā)生了減少性變化,提示構(gòu)成口腔微生態(tài)的重要球菌菌群鏈球菌和韋榮氏菌含量的改變與復(fù)發(fā)性口腔潰瘍的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。3、細(xì)菌16S rRNA基因擴(kuò)增瓊脂糖電泳及圖像分析結(jié)果表明,復(fù)發(fā)性口腔潰瘍患者口腔細(xì)菌構(gòu)成與健康成人的口腔細(xì)菌構(gòu)成存在差異。概言之,復(fù)發(fā)性口腔潰瘍患者口腔菌群構(gòu)成比及含量均發(fā)生了變化,提示復(fù)發(fā)性口腔潰瘍的發(fā)生發(fā)展與口腔微生態(tài)的變化有關(guān)。臨床上對(duì)復(fù)發(fā)性口腔潰瘍的治療應(yīng)注意口腔微生態(tài)的調(diào)整和改善。
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