前 言

過敏性休克是外界抗原性物質(zhì)進(jìn)入已致敏的機(jī)體后，在短時間內(nèi)發(fā)生的一種強烈的多臟器累及癥群，過敏性休克的表現(xiàn)與程度，依機(jī)體反應(yīng)性、抗原進(jìn)入量及途徑等而有很大差別。通常都突然發(fā)生且劇烈，若不及時處理，常可危及生命[1]。過敏反應(yīng)性疾病明顯已經(jīng)成為新型流行病的一種，在全球范圍內(nèi)，嚴(yán)重的過敏反應(yīng)越來越多，越來越超出人類的承受范圍。有流行病學(xué)顯示每一個美國人的一生中發(fā)生過敏反應(yīng)的可能性約為 3%，死亡率達(dá)到 1%[2]，隨著社會的發(fā)展和工業(yè)化的進(jìn)步，Ι 型過敏反應(yīng)的發(fā)病率正在逐年增加，由過敏反應(yīng)引發(fā)的休克死亡在法醫(yī)學(xué)實踐中也愈加常見[3]。I 型變態(tài)反應(yīng)機(jī)制通常會誘發(fā)過敏性休克性死亡,當(dāng)然，部分其他類型的免疫學(xué)機(jī)制也可誘發(fā)過敏性休克死亡[4]，不幸的患者不小心，一旦接觸了變應(yīng)原，機(jī)體便會迅速出現(xiàn)全身皮膚痰癢、潮紅，尊麻疹，血管性水腫，哮喘，呼吸困難，喉頭水腫，窒息，血壓下降，心律失常，意識喪失，休克甚至死亡[5]。過敏性休克發(fā)病無預(yù)見性，可在短時間內(nèi)從輕微的皮膚癥狀發(fā)展到死亡,來勢洶洶，因此一直是臨床醫(yī)學(xué)的難題，近幾年涉及過敏性休克死亡的醫(yī)療糾紛也逐年增多。
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1 材料與方法

1.1 實驗材料
取多人血清，將其混合離心( 4000 r/min，10 min )后，用無菌生理鹽水以1 ：10 的濃度稀釋其上清液，取上清液 0.5 mL 注入實驗組豚鼠右側(cè)后掌皮內(nèi)， 于對照組豚右側(cè)后掌皮內(nèi)注入等量的生理鹽水，1.5 min 后，實驗組豚鼠出現(xiàn)躁動不安，口鼻流涎，球瞼結(jié)膜充血，全身抽搐等過敏癥狀，以上各種癥狀表明，豚鼠過敏性休克模型建立成功。對照組未見以上過敏癥狀及其他異常表現(xiàn)。實驗組豚鼠免疫 3 周后，取人混合血清上清液 1 mL 注入實驗組豚鼠心腔內(nèi)，誘發(fā)過敏性休克死亡。對照組以生理鹽水代替混合血清注入豚鼠心腔內(nèi)，在此過程中，1 只豚鼠死亡，其余對照組豚鼠采用乙醚麻醉致死。每組均取 2 mL 心腔血離心( 4000 r/min,15 min )后，分離血清，-20 ℃凍存?zhèn)溆谩?br />
1.2 主要試劑、儀器及器材
巰基十一酸 美國 Sigma—Aldrich 公司
N 一乙基一 N’—(二甲氨基丙基)碳二亞胺 美國 Sigma—Aldrich 公司
N 一羥基琥珀酰亞胺 美國 Sigma—Aldrich 公司
兔抗人類胰蛋白酶單克隆抗體 ( Anti—TPSAB1 )美國 Sigma—Aldrich 公司
乙醇胺 美國 Sigma—Aldrich 公司
醋酸鈉 ( pH=5.5，10 mmol/L )自行配置（使用前用 0.22 μm 的膜過濾器進(jìn)行過濾，避光保存）
PBS 緩沖液 ( pH=7.4 ，0.01 mol/L )自行配置（使用前用 0.22 μm 的膜過濾器進(jìn)行過濾，避光保存）超純水

前 言.......10

1 材料與方法...........14

2 對比兩種不同的 SPR 檢測方法對實驗結(jié)果的影響 ..............18

3 結(jié)果.........20

4 討論.............28

全文總結(jié)..........32

4 討論

對比兩種不同的抗原抗體 SPR 檢測方法，以通入方法進(jìn)行芯片活化、抗體耦聯(lián)然后通入類胰蛋白酶使其與類胰蛋白酶單克隆抗體結(jié)合，實驗過程中所需試劑以及樣品的量比以滴定方法進(jìn)行芯片活化、抗體耦聯(lián)過程中所需的量要多一些，但是 SPR 的檢測方法本身就十分節(jié)省試劑和樣品，所以事實上以通入方法進(jìn)行實驗也并沒有浪費試劑和樣品，與其他檢測方法相比也是節(jié)省試劑和樣品的方法。從實驗結(jié)果中可以得出：以通入方式進(jìn)行芯片活化、抗體耦聯(lián)與以滴定方式進(jìn)行抗體活化、抗體耦聯(lián)兩種檢測方法均可有效檢測血清樣品中類胰蛋白酶的 RU 值，且兩種檢測方法的結(jié)果無明顯差異。通過研究過敏性休克死亡豚鼠血清類胰蛋白酶的表達(dá)，說明過敏性休克時肥大細(xì)胞脫顆粒，同時血清中類胰蛋白酶的表達(dá)增加并隨著脫顆粒彌散到組織間隙，在法醫(yī)學(xué)鑒定中，過敏性休克死者在死亡幾小時甚至幾十小時內(nèi)，對血清中類胰蛋白酶的表達(dá)并沒有很大影響，，另外采取有效的尸體保存方式，檢測血清中類胰蛋白酶的含量并不影響其尸檢結(jié)果。最近，有研究發(fā)現(xiàn)在哮喘患者血清中肥大細(xì)胞基因（類胰蛋白酶）的表達(dá)排前十位，說明不僅是在蛋白質(zhì)水平，在基因水平都有可能通過檢測類胰蛋白酶的表達(dá)來鑒定過敏性休克死亡，以后可以在法醫(yī)學(xué)診斷過敏性休克中加以應(yīng)用。因此，類胰蛋白酶在過敏性休克發(fā)生發(fā)展過程中有十分重要的作用，我們必須十分關(guān)注重視類胰蛋白酶類蛋白物質(zhì)，研究者在未來應(yīng)該進(jìn)一步做有關(guān)過敏性休克病人血清中類胰蛋白酶的蛋白質(zhì)以及基因表達(dá)的研究�？傊�，應(yīng)用 SPR 生物傳感器可以快速有效得檢測到過敏性休克死亡血清中類胰蛋白酶表達(dá)的增多，可以為以后的法醫(yī)學(xué)診斷、鑒定提供一項新的技術(shù)方法，并未后來的研究者提供一種新的思路。
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全文總結(jié)

1.過敏性休克死亡血清類胰蛋白酶表達(dá)增多。
2.冷凍 3 天的條件下基本不會影響死者血清類胰蛋白酶的含量。
3.過敏性休克死者死后 20 小時左右血清類胰蛋白酶的含量無明顯改變。4.SPR 技術(shù)可以有效檢測血清類胰蛋白酶含量及濃度的變化。5.SPR 生物傳感器檢測方法的不同不影響檢測結(jié)果。
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參考文獻(xiàn)（略）