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藥學(xué)

測定接骨丸中馬錢子堿含量

發(fā)布時(shí)間：2015-10-06 12:28

　　接骨丸至是由甜瓜子、土鱉蟲、地龍、炒桂枝、郁金等八味中藥經(jīng)粉碎一定細(xì)度，和一定比例的馬錢子粉混合過篩，水泛丸所。它在臨床上主要用于外界暴力所致的跌打損傷，傷筋動(dòng)骨等外科疾病，應(yīng)用于臨床多年，療效確切，作為治療傷筋動(dòng)骨的要藥，在市場上占有巨大份額。馬錢子在方中作為臣藥，主要輔助君藥加強(qiáng)治療。但是馬錢子作為劇毒藥物，其所含的士的寧和馬錢子堿有興奮中樞神經(jīng)的作用，使用過量容易導(dǎo)致驚厥、抽搐和昏迷等嚴(yán)重神經(jīng)系統(tǒng)不良反應(yīng)。為了控制藥品的質(zhì)量，本文采用高效液相色譜( HPLC) 法對接骨丸中馬錢子堿含量進(jìn)行測定，進(jìn)而控制該藥品的安全范圍，該方法操作簡單，結(jié)果準(zhǔn)確且重現(xiàn)性較好。

　　1 儀器與試藥

　　1. 1 樣品來源

　　接骨丸( 河北萬歲藥業(yè)有限公司，批號:131201) ，粉碎至一定細(xì)度，備用。

　　1. 2 儀器和試藥

　　HP – 1100 高效液相色譜儀( 美國，型號HP – 1100) ; 色譜柱，Agilent C18( 250 mm × 4. 6 mm，5 μm)柱; 超聲波清洗器( 北京醫(yī)療設(shè)備二廠，型號kh – 3200DB) ;十萬分之一電子天平( AE240) ; 甲醇和乙腈試液為色譜純;雙蒸水自制; 正己烷、二氯甲烷、濃氨均為分析純。馬錢子堿對照品( 中國藥品生物制品鑒定所，批號110753 – 200212) ，士的寧對照品( 中國藥品生物制品制定所，批號: 110752 -201212) 。

　　2 方法與結(jié)果

　　2. 1 色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

　　色譜柱為Agilent C18( 250. 0 mm × 4. 6 mm，5 μm) 柱; 流動(dòng)相: 乙腈∶0. 2%醋酸水溶液( 25∶75) ，等度洗脫，檢測波長設(shè)定為260 nm; 柱溫為30 ℃; 流速為1 mL·min – 1 ; 理論板數(shù)按馬錢子堿的峰計(jì)算應(yīng)不低于5 000。

　　2. 2 對照品溶液的制備

　　精密稱取士的寧、馬錢子堿對照品適量，加乙酸乙酯制成每1 L 含0. 4 g 的溶液，即得。

　　2. 3 供試品溶液制備

　　取三份本品粉末分別0. 5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加氯仿25 mL 與濃氨試液1 mL，密塞，輕輕振搖，稱定重量，放置24 h，，再稱定重量，用氯仿補(bǔ)足減失的重量，充分振搖，濾過，精密量取濾液10 mL，置分液漏斗中，用硫酸溶液( 3 mL→100 mL) 提取5 次，每次15 mL，合并硫酸液，加濃氨試液調(diào)節(jié)pH 值至9 ～ 10，用氯仿提取5 次，每次20 mL，合并氯仿液，蒸干，殘?jiān)右宜嵋阴ト芙�，轉(zhuǎn)移至10 mL 量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，即得。

　　2. 4 陰性供試品溶液的制備

　　按照處方的配比情況，除去馬錢子，其他飲片按照接骨丸的制備方法制成丸劑，根據(jù)供試品的制備方法制備陰性供試品溶液，備用。

　　2. 5 方法學(xué)考察

　　2. 5. 1 線性關(guān)系考察精密吸取”2. 2″項(xiàng)下混合對照品溶液2 μL、4 μL、6 μL、8 μL、10 μL 注入高效液相色譜儀，按上述色譜條件測定峰面積; 縱坐標(biāo)為峰面積，橫坐標(biāo)為進(jìn)樣量，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為馬錢子堿Y = 0. 302 4X -0. 402 3( r = 0. 999 95) ; 計(jì)算結(jié)果表明馬錢子堿在0. 080 ～0. 400 μg 范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

　　2. 5. 2 精密度試驗(yàn)精密吸取同一供試品溶液4 μL，連續(xù)進(jìn)樣6 次，記錄峰面積，馬錢子堿的RSD 值0. 318%，結(jié)果表明儀器有良好的精密度。

　　2. 5. 3 穩(wěn)定性試驗(yàn)精密吸取同一個(gè)供試品溶液分別在0 h、2 h、4 h、6 h、8 h 重復(fù)進(jìn)樣一次，每次進(jìn)樣4 μL，測定8h，記錄下馬錢子堿的峰面積，RSD 值為1. 36%，說明了馬錢子堿在8 h 內(nèi)穩(wěn)定性較好。

　　2. 5. 4 重復(fù)性試驗(yàn)精密稱定6 份同一批供試品適量，按照制備供試品溶液的方法制備，平行測定，每次進(jìn)樣4 μL，記錄馬錢子堿的峰面積，結(jié)果RSD 值2. 83%，表明該方法的重復(fù)性良好。

　　2. 5. 5 加樣回收率試驗(yàn)稱定已知含量的接骨丸( 批號: 20130912) 樣品5 份，每份約0. 5 g，精密稱定，精密加入一定質(zhì)量的馬錢子堿對照溶液，按照上述測定含量的方法測定。每次進(jìn)樣4 μL，結(jié)果馬錢子堿的加樣回收率為98. 57%，RSD值為1. 64%。

　　2. 5. 6 專屬性試驗(yàn)精密吸取陰性供試品溶液4 μL，注入高效液相色譜儀中進(jìn)行測定，陰性供試品在馬錢子堿對應(yīng)的保留時(shí)間無干擾。

　　2. 5. 7 樣品含量測定10 批樣品，每份1 g，精密稱定，按照2. 3 項(xiàng)下制備方法，制成供試品溶液，按上述色譜條件進(jìn)行測定，計(jì)算10 批中馬錢子堿的含量。

　　3 討論

　　接骨丸作為臨床治療跌打損傷，傷筋作動(dòng)骨的要藥，具有散血熱，消腫止痛的作用。馬錢子為臣藥，在接骨丸中起到不可缺少、舉足輕重的作用，但馬錢子有劇毒的，安全用藥范圍窄，過量會(huì)產(chǎn)生嚴(yán)重的神經(jīng)系統(tǒng)不良反應(yīng)。中藥部頒標(biāo)準(zhǔn)中接骨丸無含量測定項(xiàng)，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)簡單，且對毒性藥馬錢子粉中的士的寧、馬錢子堿沒有明確的含量控制，對藥品的安全性沒有充分考慮，不利于控制本品質(zhì)量。針對接骨丸成分分析中所存在的問題，為提高藥品安全，使其質(zhì)量可控，為保證臨床用藥安全降低其中毒風(fēng)險(xiǎn)，本文采用高效液相色譜法測定馬錢子中馬錢子堿的含量。本實(shí)驗(yàn)前期對比了超聲、回流和萃取等方法提取馬錢子中馬錢子堿，最終發(fā)現(xiàn)使用實(shí)驗(yàn)中2，3 項(xiàng)下的方法提取所得到的馬錢子堿的含量相對較高。該方法是對2010 年版《中國藥典》方法進(jìn)行了改進(jìn)，能夠更為有效的提取所需成分的含量。本實(shí)驗(yàn)對比了C8、C18兩種不同的色譜柱對馬錢子堿的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)C18柱對馬錢子堿有更好的響應(yīng)值，且其他峰的干擾也相對較少。選擇不同比例的正己烷、二氯甲烷，甲醇、濃氨試液和正己烷、二氯甲烷，乙腈、水作為流動(dòng)相，對比不同比例的流動(dòng)相對馬錢子堿的分離度的情況，最終選擇乙腈和0. 2%醋酸水溶液作為流動(dòng)相能夠得到較高的分離度。

　　本實(shí)驗(yàn)建立的高效液相色譜法測定接骨丸中毒性成分馬錢子堿的含量。它能夠取代比較傳統(tǒng)的薄層檢測方法，增加了劇毒性成分的檢測類別，為控制接骨丸的質(zhì)量提供了一定的依據(jù)。高效液相色譜法測定馬錢子堿分析速度快，操作簡單，且準(zhǔn)確度高，方法學(xué)考察都符合要求，能夠?yàn)樯a(chǎn)中接骨丸的安全范圍制定最低定量限，降低因?yàn)樵幉牡馁|(zhì)量不穩(wěn)定出現(xiàn)的可能的藥品無效或者是毒劇成分超標(biāo)的情況，保障了臨床用藥的安全有效合理。

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