發(fā)布時間：2016-06-17 05:59

第 1 章   文獻(xiàn)綜述

20 世紀(jì) 80 年代中期，全世界陸續(xù)采取一系列手段和措施禁止或限制畜禽養(yǎng)殖業(yè)使用抗生素，無抗生態(tài)養(yǎng)殖技術(shù)逐漸成為人們研究的熱點之一[1]。益生菌添加劑是一種安全、綠色、活菌發(fā)酵的飼料添加劑，能夠改善動物腸道菌群、形態(tài)結(jié)構(gòu)，從而提高機體免疫機能、飼料利用率和動物產(chǎn)品質(zhì)量、降低動物發(fā)病率、改善生態(tài)環(huán)境，保證了畜牧業(yè)的養(yǎng)殖效益和持續(xù)健康發(fā)展。因此益生菌添加劑的開發(fā)利用已被各國逐漸重視[2-4]。 

1.1  益生菌在畜牧業(yè)的應(yīng)用現(xiàn)狀

1.1.1  益生菌的概述
益生菌是對腸道菌群平衡具有重要作用的物質(zhì)，能夠通過改善動物腸道菌群平衡，從而促進(jìn)動物機體生長的一種或多種微生物組合而成的活性微生物制劑[5]。2001 年，世界糧農(nóng)組織(FAO)和世界衛(wèi)生組織(WHO)將益生菌定義為：人體和動物攝取適當(dāng)?shù)牧�，對人體和動物的健康能發(fā)揮有效作用的活菌[6]。 畜牧業(yè)應(yīng)用的益生菌種類較多，既可以用單一的純菌種作為益生菌制劑，也可以用多種混合的菌種作為制劑。大量試驗證明，復(fù)合益生菌的作用效果要比單一菌種的益生菌效果明顯[7]。益生菌分布范圍廣、種類多，目前依據(jù)微生物菌種的類型可將益生菌劃分為乳桿菌屬、雙歧桿菌屬類和部分革蘭氏陽性球菌類三大類。最常用的益生菌種類有雙歧桿菌、乳酸桿菌和一些鏈球菌[8]。隨著規(guī)�；B(yǎng)殖對畜禽產(chǎn)生的應(yīng)激刺激因素增多，畜禽腸道微生物菌群極易被破壞，人們往往通過添加益生菌，以促進(jìn)畜禽腸道微生物菌群的恢復(fù)。由于許多益生菌都是從不同環(huán)境中分離篩選出來，益生菌進(jìn)入畜禽體內(nèi)后，常因益生菌適于生存環(huán)境的差異大，難以適應(yīng)畜禽機體內(nèi)強酸、強堿等環(huán)境因素，從而影響了益生菌在腸道的黏附定植和生長繁殖，益生菌不能充分發(fā)揮其對畜禽機體的作用效果[9]。大量研究結(jié)果指出，許多細(xì)菌具有種屬特異性，同源性細(xì)菌有利于在相同種屬機體內(nèi)定植，故比較理想的益生菌菌種最好是來自于與原宿主、原生態(tài)環(huán)境和原微生態(tài)系統(tǒng)相適應(yīng)的同源動物腸道菌[10-11]。
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1.2  菊糖在畜牧業(yè)的應(yīng)用現(xiàn)狀
菊糖（Inulin）又稱菊粉、土木香粉，是由 D-呋喃果糖經(jīng) β–（2，1）糖苷鍵連接多聚果糖，末端連接一個葡萄糖基，，聚合度 2～60，分子量為 3000～5000。菊糖在冷水中微溶，在熱水中溶解迅速，與碘反應(yīng)不顯藍(lán)色，無還原性，在水中呈左旋性質(zhì)。菊糖廣泛存在于自然界中，存在于海藻、植物、細(xì)菌和真菌中；目前菊糖的主要來源在植物，以能量的形式存在于多種植物中，尤其在菊科植物中含量大，例如菊芋、菊苣[36]。菊糖與寡聚糖一樣，對動物腸道內(nèi)的微生態(tài)體系起調(diào)節(jié)作用，能與病原菌的外源凝集素特異性相結(jié)合，使病原菌不能在腸道上粘附，而隨排泄物經(jīng)消化道排出體外；菊糖在大腸中發(fā)酵能夠產(chǎn)生有機酸、SCFA 和氣體能夠促進(jìn)大腸的蠕動，有利于這些物質(zhì)向大腸后段運動，同時起到加快腸道排泄有害微生物的作用[37]。亦有報道稱，菊糖為益生素的主要成分之一，其核心功能可以選擇性地促進(jìn)益生菌生長或活性的增加從而改善腸道菌群[38]。 
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第 2 章   雞源乳酸菌的分離鑒定

越來越多的畜禽養(yǎng)殖生產(chǎn)實踐證明，益生菌具有提高畜禽生產(chǎn)性能和增強對畜禽保健的作用，益生菌被看作替代抗生素的優(yōu)勢產(chǎn)品被廣泛關(guān)注[34-36]。但從益生菌菌種的選擇來看仍存在一些問題，主要是由于體外分離的益生菌不易存活，進(jìn)入體內(nèi)消化道系統(tǒng)經(jīng)后，往往經(jīng)受不住消化道強酸強堿的作用，此外益生菌屬種的差異性使益生菌不利于在腸道內(nèi)定植等問題導(dǎo)致了益生菌不能在動物機體內(nèi)充分發(fā)揮功能[31,53]。本試驗從太行雞盲腸內(nèi)分離篩選出雞源性乳酸菌，為研發(fā)禽用微生物添加劑的菌種篩選提供思路。 

2.1   材料與方法 

從健康太行雞的盲腸上刮取黏膜和內(nèi)容物 1g，稀釋于 9ml 無菌生理鹽水中，充分震蕩搖勻，吸取 1ml 混合液置于裝有 9ml 生理鹽水的無菌試管中，此稀釋度為 10-1。重復(fù)以上稀釋過程，稀釋 7 次，吸取 10-5、10-6、10-7三個梯度的菌液0.5ml，利用平板涂布法分別均勻平鋪于加有碳酸鈣的 MRS 培養(yǎng)基平板上，待其完全吸收，37℃倒置培養(yǎng) 48h。選取不同形態(tài)的菌落進(jìn)行鏡檢，將目標(biāo)菌接種于MRS 培養(yǎng)基進(jìn)行分離純化培養(yǎng)，再將純化的菌種接種于 MRS 斜面培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng) 48h 后，置于 4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?nbsp;

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2.2   結(jié)果與分析
從加有碳酸鈣的 MRS 培養(yǎng)基中選擇產(chǎn)生溶鈣圈菌落，分離篩選出 3 株乳酸菌，再根據(jù)細(xì)菌形態(tài)的鏡檢結(jié)果，將菌株分別編號為 B2、C2 和 L13，分離菌株的培養(yǎng)性狀及形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果見表 2-3。青腳麻雞等地方雞是適于養(yǎng)殖環(huán)境條件相對惡劣的地方品種，具有耐粗飼、抗病和抗應(yīng)激能力強等特性，它們長期形成的抗應(yīng)激能力可以影響其腸道內(nèi)微生物菌群各方面的機能[34-36]。王進(jìn)[58]等選用地方青腳麻雞對肉雞腸道定殖菌的生活狀態(tài)及分布進(jìn)行了研究，結(jié)果顯示芽孢菌分布在腸道中定植，酵母菌和乳酸菌的定殖較少。王立鈞[59]等對東臺地方草雞的生長性能和空腸結(jié)構(gòu)做出研究，結(jié)果顯示低聚木糖與地衣芽孢桿菌以合生素形式添加到東臺地方草雞日糧中時可產(chǎn)生協(xié)同作用。王凈[60]進(jìn)行松針粉對柴雞生產(chǎn)性能研究，可以很好改善生產(chǎn)性能。本試驗試從太行雞盲腸中分離乳酸菌，篩選出具有適應(yīng)環(huán)境能力強的菌株，作為雞源性乳酸菌菌種，達(dá)到滿足雞宿主特異性要求，為研制禽用的微生物添加劑提供比較理想的菌種來源。 
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第 3 章   乳酸菌復(fù)合物的體外抑制試驗.......... 13 
3.1   材料與方法.......... 13 
3.2   結(jié)果與分析.......... 15 
3.3   討論...... 17 
3.4   小結(jié) ..... 18 
第 4 章   乳酸菌復(fù)合物對肉雞腸道菌群...... 19 
4.1   材料與方法.......... 19
4.2   結(jié)果與分析.......... 21 
4.3   討論...... 27 
4.4   小結(jié)...... 30

第 4 章  乳酸菌復(fù)合物對肉雞腸道菌群和形態(tài)結(jié)構(gòu)、生化指標(biāo)及生產(chǎn)性能影響

隨著畜禽養(yǎng)殖業(yè)的快速發(fā)展，抗生素對畜禽養(yǎng)殖行業(yè)帶來的負(fù)面效應(yīng)成為制約畜牧行業(yè)發(fā)展的不利因素，益生菌作為綠色健康的飼料添加劑正在逐漸替代抗生素已成為發(fā)展趨勢之一[13,21]。李勝路等表明乳酸菌、菊糖可以改善雞的腸道菌群和腸道結(jié)構(gòu)及調(diào)節(jié)酶類的分泌，從而提高肉雞的生產(chǎn)性能[34-36]。本試驗主要研究菊糖和 3 株乳酸菌對肉雞腸道菌群、腸道結(jié)構(gòu)、血清生化指標(biāo)和生產(chǎn)性能的聯(lián)合作用，為微生態(tài)飼料添加劑的研發(fā)提供實驗依據(jù)。用無菌剪刀剪開盲腸腸壁，刮取腸壁部分的腸道黏膜和內(nèi)容物 1g，置于盛有 9ml 的無菌生理鹽水的試管中,充分混勻，此時即為 10-1稀釋度的菌液，重復(fù)以上過程，依次制成 10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7的菌液，選擇 10-5、10-6、10-7三個梯度的菌液。由高稀釋度開始，用微量取樣器分別吸取 1mL 稀釋液接種于 45℃左右的 MRS 培養(yǎng)基（加碳酸鈣）和伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基內(nèi)，充分混勻，待其凝固，放到 37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 24-48h，每稀釋度做 3 個重復(fù)，測量乳酸菌和大腸桿菌的數(shù)量。細(xì)菌數(shù)量采用平板菌落計數(shù)法進(jìn)行統(tǒng)計，依照《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗菌落總數(shù)測定》[73]（GB47892-2010）進(jìn)行測定，最后用 1g 腸道內(nèi)容物中細(xì)菌個數(shù)用(CFU)/g 表示。 
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結(jié)論

本研究從太行雞腸道分離 3 株乳酸菌（短乳桿菌、糞腸球菌、盲腸腸球菌），觀察了其凝集特性，探討了乳酸菌復(fù)合物對 O78大腸桿菌的體外聯(lián)合抑制作用，檢測了其對肉雞盲腸菌群、十二指腸和空腸形態(tài)結(jié)構(gòu)、血清生化指標(biāo)和生產(chǎn)性能的作用效果。得出如下結(jié)論： 
（1）分離的短乳桿菌、糞腸球菌、盲腸腸球菌 3 株乳酸菌中，自凝能力強的菌株，其互凝能力也強。 
（2）菊糖能促進(jìn)益生菌對 O78大腸桿菌的抑菌作用，但此作用并不隨菊糖濃度增加而顯著增強。 
（3）乳酸菌復(fù)合物對肉雞盲腸菌群生長繁殖均有不同程度的影響，14 日齡肉雞盲腸益生菌數(shù)極顯著升高；28 日齡肉雞盲腸大腸桿菌數(shù)顯著降低。 
（4）向肉雞飲水中添加 3‰乳酸菌復(fù)合物，肉雞十二指腸和空腸絨毛高度、絨隱比均有顯著變化；肉雞血清堿性磷酸酶、超氧化物歧化酶、體重和料重比均有不同程度的改善。 
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參考文獻(xiàn)(略)

本文編號：58120