1 文獻(xiàn)綜述 

活性氧（ROS）是生物有氧代謝過(guò)程中的一種副產(chǎn)品。由于活性氧存在未配對(duì)的自由電子，因此具有很強(qiáng)的化學(xué)反應(yīng)活性。正常情況下生物體內(nèi)活性氧的含量是通過(guò)其產(chǎn)生和清除來(lái)保持一個(gè)動(dòng)態(tài)的平衡。但是這種穩(wěn)態(tài)會(huì)受到一些內(nèi)源性或外源性的有害刺激干擾而被打破。它們通過(guò)增加生物體活性氧產(chǎn)生量或降低其活性氧的清除能力，造成活性氧的產(chǎn)生超出了生物體自身抗氧化系統(tǒng)的清除能力，使生物體出現(xiàn)氧化應(yīng)激（Oxidative stress）現(xiàn)象[2]。過(guò)高的活性氧水平會(huì)對(duì)細(xì)胞和基因結(jié)構(gòu)造成損壞�；钚匝蹩梢詥�(dòng)一個(gè)鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，易與生物膜上的不飽和脂肪酸及膽固醇反應(yīng)，使之形成自由基，導(dǎo)致膜結(jié)構(gòu)發(fā)生變化甚至遭到破壞。反應(yīng)中形成的自由基可以從生物膜中相鄰的蛋白質(zhì)中奪取氫離子，造成膜蛋白結(jié)構(gòu)的改變，進(jìn)而影響蛋白的活性。核酸分子中的各個(gè)部分都可能遭到自由基的攻擊，造成 DNA 鏈和氫鏈的斷裂。 生物體通過(guò)酶促和非酶促清除系統(tǒng)清除過(guò)量的自由基，其中酶促系統(tǒng)包括：超氧化物歧化酶（SOD）、過(guò)氧化氫酶（CAT）、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GPx）等；非酶系統(tǒng)包括：維生素 C、維生素 E 和胡蘿卜素等[3]。

.......

2 材料與方法 

2.1 試驗(yàn)生物 

試驗(yàn)用斑馬魚(yú)為野生型品系，平均體長(zhǎng)為（3.16±0.14）cm，，平均體重為（0.55±0.04）g，購(gòu)于杭州市明紅水族館。雌雄分開(kāi)馴養(yǎng)，水溫控制在 25±1℃，pH 為 6.5-7.5，光照每天 14h。每日早晚兩次定時(shí)投喂成魚(yú)顆粒飼料，投喂量以斑馬魚(yú)五分鐘左右吃完為宜。保持飼養(yǎng)環(huán)境的清潔，及時(shí)清除糞便和食物殘?jiān)�。自然死亡率保持�?5%以下，隨機(jī)挑選體型大小一致，健康活潑的雌魚(yú)個(gè)體用于試驗(yàn)。 

2.2 供試農(nóng)藥和主要試劑

試驗(yàn)期間為保持試驗(yàn)水環(huán)境的清潔，每隔 48h 更換所有藥液。試驗(yàn)采用半靜態(tài)水體染毒方法，試驗(yàn)期間每天更換一半染毒溶液，以確保暴露濃度恒定不變，持續(xù)染毒 28d。根據(jù) BCPC《農(nóng)藥手冊(cè)》的數(shù)據(jù)，螺蟲(chóng)乙酯在 25℃下，pH=7 的水中，半衰期為 8.6 天。實(shí)驗(yàn)室前期采用島津高效色譜儀，對(duì)模擬實(shí)驗(yàn)條件下水中螺蟲(chóng)乙酯的消解情況。結(jié)果顯示，120h 后的消解率僅為 20%。因此，48h 更換1 次藥液不影響試驗(yàn)結(jié)果。

3 結(jié)果與分析 ......... 16 

3.1 螺蟲(chóng)乙酯對(duì)雌斑馬魚(yú)體重的影響 .............. 16 
3.2 螺蟲(chóng)乙酯對(duì)雌斑馬魚(yú)丙二醛含量的影響 ............. 16 
3.3 螺蟲(chóng)乙酯對(duì)雌斑馬魚(yú)氧化應(yīng)激相關(guān)酶活性及基因表達(dá)量的影響 .............. 17
4 討論 ............. 26 
4.1 螺蟲(chóng)乙酯對(duì)雌斑馬魚(yú)的氧化應(yīng)激效應(yīng) ....... 26
4.2 螺蟲(chóng)乙酯對(duì)雌斑馬魚(yú)促性腺激素及受體的影響 ................. 29
5 全文總結(jié) .......... 31
5.1 結(jié)論................ 40
5.2 不足與展望......... 43

4 討論 

4.1 螺蟲(chóng)乙酯對(duì)雌斑馬魚(yú)的氧化應(yīng)激效應(yīng) 

環(huán)卵巢的試驗(yàn)結(jié)果顯示，SOD 活性的影響在 14d 時(shí)低濃度活性降低，而隨著給藥濃度的增加 SOD 活性也隨之增加，并且顯著增加農(nóng)藥處理組的 Cu/Zn-sod mRNA 的表達(dá)水平。從 21d 和 28d 開(kāi)始 SOD 活性隨著農(nóng)藥濃度的增加而逐漸降低，且在 28d 時(shí)三個(gè)濃度處理組均低于空白對(duì)照。分析其可能原因：（1）螺蟲(chóng)乙酯直接抑制了 SOD 的活性；（2）螺蟲(chóng)乙酯先誘導(dǎo)斑馬魚(yú)卵巢內(nèi) ROS 的加速產(chǎn)生和積累，過(guò)多的 ROS 影響了 SOD 合成過(guò)程及其結(jié)構(gòu)單元，使其活性下降[127]。結(jié)合卵巢中 MDA 含量上的變化可以看出，在 21d 和 28d 時(shí) MDA 的含量在各濃度處理組中的變化趨勢(shì)與 SOD 的活性恰好相反。MDA 正是過(guò)量 ROS 與膜發(fā)生脂質(zhì)過(guò)氧化的產(chǎn)物，這一結(jié)果正與推測(cè)的第二種原因相符合。 卵巢中 CAT 活性在 14d 時(shí)36μg/L 濃度處理組出現(xiàn)了顯著上升。認(rèn)為低濃度螺蟲(chóng)乙酯短期暴露對(duì)斑馬魚(yú)卵巢 CAT 的活性有促進(jìn)作用。這可能是由于機(jī)體在承受氧化壓力時(shí)，為提高機(jī)體 ROS 清除能力減少氧化損傷所產(chǎn)生的反應(yīng)。從 Cat相對(duì)表達(dá)量在 14d 時(shí)的變化情況也可以證明這一點(diǎn)。而隨著農(nóng)藥濃度的增加其CAT 活性顯著下降，并在 720μg/L 濃度組出現(xiàn)極顯著差異。該結(jié)果與 Aeif 等關(guān)于污染物對(duì)魚(yú)類的毒性研究結(jié)果相似[128,129]，分析原因可能與高濃度螺蟲(chóng)乙酯能抑制卵巢中CAT活性有關(guān)，并預(yù)示著過(guò)多的活性氧給機(jī)體帶來(lái)氧化損傷。7

4.2 螺蟲(chóng)乙酯對(duì)雌斑馬魚(yú)促性腺激素及受體的影響 
實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，螺蟲(chóng)乙酯染毒后 FSH 含量在 720μg/L 濃度處理組 14d 時(shí)出現(xiàn)了顯著降低，而在 21d 和 28d 時(shí)又恢復(fù)到與對(duì)照相同的水平上。而對(duì) LH 含量的測(cè)定結(jié)果則顯示，螺蟲(chóng)乙酯染毒對(duì) LH 并沒(méi)有顯著的影響。從以上結(jié)果可知，在螺蟲(chóng)乙酯 720μg/L 濃度暴露下斑馬魚(yú)機(jī)體短時(shí)間會(huì)出現(xiàn) FSH 降低的情況。從螺蟲(chóng)乙酯對(duì)卵巢氧化應(yīng)激效應(yīng)的結(jié)果中可知在 720μg/L 濃度下卵巢出現(xiàn)氧化應(yīng)激效應(yīng)，F(xiàn)SH 在斑馬魚(yú)卵巢細(xì)胞增殖、激素的合成等生理功能中起著重要的作用。因此，自然條件下斑馬魚(yú)暴露于 720μg/L 濃度的螺蟲(chóng)乙酯下可能會(huì)對(duì)雌魚(yú)卵巢存在風(fēng)險(xiǎn)。
.........

5 全文總結(jié) 

5.1 結(jié)論 

本論文通過(guò)對(duì)雌斑馬魚(yú)卵巢和肝臟的脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物含量、過(guò)氧化酶活性以及相關(guān)基因的表達(dá)情況來(lái)評(píng)價(jià)螺蟲(chóng)乙酯造成雌性斑馬魚(yú)機(jī)體的氧化損傷。通過(guò)對(duì)GTH 及其受體的研究來(lái)評(píng)價(jià)螺蟲(chóng)乙酯對(duì)斑馬魚(yú)內(nèi)分泌系統(tǒng)的影響。本文旨在結(jié)合以上兩點(diǎn)對(duì)螺蟲(chóng)乙酯的毒性效應(yīng)進(jìn)行了解，并為其環(huán)境風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)提供依據(jù)。本論文得到的主要結(jié)論如下： （1）螺蟲(chóng)乙酯可誘導(dǎo)斑馬魚(yú)卵巢和肝臟細(xì)胞氧化應(yīng)激效應(yīng)的產(chǎn)生。染毒后抑制卵巢中 SOD 的活性，使卵巢細(xì)胞產(chǎn)生脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，產(chǎn)生 MDA。并且在染毒初期顯著上調(diào) Cu/Zn-sod 和 Cat 的相對(duì)表達(dá)量。在肝臟中 SOD 和 CAT 受到螺蟲(chóng)乙酯影響后活性增強(qiáng)。在 14d 時(shí)肝臟出現(xiàn)脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，造成 MDA 的積累，并上調(diào) Cat 相對(duì)表達(dá)量。 （2）螺蟲(chóng)乙酯對(duì)雌斑馬魚(yú) GTH 及其受體也會(huì)產(chǎn)生影響。影響主要表現(xiàn)在對(duì)GTHR 的表達(dá)量上，28d 時(shí)螺蟲(chóng)乙酯顯著下調(diào)了 FSHR 的相對(duì)表達(dá)量，21d 時(shí)上調(diào)了各濃度組 LHR 的 mRNA 表達(dá)量。720μg/L 濃度顯著降低了 14d 時(shí) FSH 的含量，并增加了 VTG 在 28d 時(shí)的含量。 

5.2 不足與展望 

本文從生化水平和分子水平研究了螺蟲(chóng)乙酯對(duì)肝臟和卵巢的氧化應(yīng)激效應(yīng)以及內(nèi)分泌系統(tǒng)中的相關(guān)激素和受體的測(cè)定。取得一定的結(jié)果，但也存在著不足之處，需進(jìn)一步完善。 （1）本研究從生化指標(biāo)上對(duì)肝臟和卵巢的氧化應(yīng)激效應(yīng)進(jìn)行測(cè)定，應(yīng)進(jìn)一步進(jìn)行對(duì)相關(guān)器官組織形態(tài)學(xué)的研究，來(lái)更深入的研究螺蟲(chóng)乙酯對(duì)水生生物的毒性。 （2）螺蟲(chóng)乙酯可顯著上調(diào) LHR 的表達(dá)量，其影響機(jī)制需進(jìn)一步研究。

.........

參考文獻(xiàn)（略）

本文編號(hào)：106368