在特定可控酶解條件下制備獲得條斑紫菜1 000 Da以下小分子多肽為主的蛋白酶解液,分析發(fā)現(xiàn)其具有對(duì)α-葡萄糖苷酶和二肽基肽酶IV(dipeptidyl peptidase IV,DPP-IV)的雙酶抑制活性,且具有良好的pH值、溫度穩(wěn)定性和胃腸消化耐受性。將酶解液經(jīng)超濾、納濾、凝膠過濾層析分離純化后,采用超高效液相色譜-電噴霧-四極桿飛行時(shí)間質(zhì)譜對(duì)活性成分進(jìn)行鑒定,解析出2條多肽氨基酸序列為Ala-Pro、Pro-Gly-Gly-Val。按上述序列合成出這2條多肽(純度99.69%)表征其對(duì)2種酶的抑制活性,結(jié)果表明:Pro-Gly-Gly-Val為雙酶抑制肽,它對(duì)α-葡萄糖苷酶的IC50為18.60 mmol/L,對(duì)DPP-IV的IC50為17.80 mmol/L;而Ala-Pro只對(duì)DPP-IV有抑制作用,其IC50為4.65 mmol/L。

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【部分圖文】：

圖1條斑紫菜酶解多肽分子質(zhì)量分布（a）和相對(duì)含量（b)

2.1條斑紫菜酶解多肽雙酶抑制活性分析α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶是糖代謝途徑中的關(guān)鍵酶，調(diào)控碳水化合物降解為單糖的反應(yīng)[24]。α-葡萄糖苷酶抑制劑和α-淀粉酶抑制劑可以延緩多糖向單糖的轉(zhuǎn)化。DPP-IV抑制劑通過抑制DPP-IV對(duì)GLP-1的降解，提高餐后胰島素水平。通過測定....

圖2粗肽液對(duì)兩種酶的pH值（a）、溫度（b）穩(wěn)定性

如圖2a所示，條斑紫菜酶解多肽具有較寬的pH值耐受范圍。在pH?3～10范圍內(nèi)，條斑紫菜酶解多肽對(duì)α-葡萄糖苷酶抑制活性保持率達(dá)98%以上；DPP-IV抑制活性保持率在pH?3～8范圍內(nèi)逐漸上升且總體抑制活性保持率高于96%,pH?8.0以上時(shí)開始逐漸降低。因此，紫菜多肽....

圖3粗肽液對(duì)兩種酶的胃腸消化穩(wěn)定性

2.2.2體外模擬胃腸消化粗肽液經(jīng)胃消化階段后，其α-葡萄糖苷酶抑制活性穩(wěn)定不變，再經(jīng)十二指腸環(huán)境下胰蛋白酶作用后抑制率升高了30.48%;DPP-IV抑制率在胃消化和腸消化階段都有一定的提高，分別上升了15.38%、39.23%（圖3）。天然的活性肽是否能作為降血糖藥物的代替....

圖4SephadexG-10凝膠層析圖譜（a）及各個(gè)峰的抑制活性（b)

基于粗肽液較高的雙酶抑制活性，良好的pH值、溫度和胃腸消化穩(wěn)定性，對(duì)粗肽液進(jìn)行進(jìn)一步分離純化，解析其多肽氨基酸組成。凝膠過濾層析是按分子質(zhì)量大小進(jìn)行分離的，Sephadex?G-10交聯(lián)度高、網(wǎng)孔小，分級(jí)范圍小于700?Da[34]。如圖4a所示，納濾后的條斑紫菜酶解液經(jīng)Sep....

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