苦杏仁主要產(chǎn)自新疆,雖然具有極高的利用價值,但目前對它的開發(fā)并不充分,浪費了它的資源優(yōu)勢。若能進一步對其進行研究和利用,必將發(fā)揮更大的效用并創(chuàng)造極高的收益。本研究基于固定化酶對苦杏仁谷蛋白的酶解作用進行分析,首先對所使用的蛋白酶進行了篩選,最終選擇堿性蛋白酶,然后使用磁性納米粒子制作出固定化微球,進而確定制備相應酶的最適的工藝。其次,為完成ACE抑制肽的合成,利用了單因素方法確定最合適的酶解條件,并通過響應面對其進行優(yōu)化。最后,利用超濾以及層析方法對得到的短肽進行分離提純,通過LC-MS/MS對其氨基酸序列進行分析。本研究得到以下主要結(jié)論:(1)基于苦杏仁谷蛋白進行研究,選擇五種較常見的蛋白酶對其進行酶解,分別對五種酶設(shè)置相應的最適條件,分析不同酶對谷蛋白的作用效果,通過最終得到的短肽數(shù)量以及谷蛋白的水解程度,對各種酶的酶解能力進行比較。結(jié)果表明:相同條件下,堿性蛋白酶的效果最好,并且它的ACE抑制活性也相對較高,抑制率可達到68.08±1.96%。(2)利用Fe₃O₄磁性納米粒子固定化堿性蛋白酶,從pH、作用時間等因素進行分析,研究酶的相對...

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖2-1不同蛋白酶酶解苦杏仁谷蛋白短肽生成率與水解度變化圖

2.2.1不同蛋白酶酶解苦杏仁谷蛋白水解度和短肽生成率的比較如圖2-1所示,水解初期,水解時間越長,水解程度就會越高,反應進行一段時間后,由于底物以及酶切位點開始變少,因此反應也開始逐漸變得平穩(wěn)起來。通過圖2-1可發(fā)現(xiàn),堿性蛋白酶的短肽生成率以及水解度比起木瓜蛋白酶要高一些。而....

圖3-1給酶量對固定化效果的影響

3.2.1.1給酶量對制備固定化酶影響從圖3-1中可以看出,給酶量與相對酶活力呈正相關(guān)變化趨勢,且差異顯著(P<0.05)。當給酶量為2g時,反應達到峰值,此時酶和載體之間達到飽和狀態(tài)。繼續(xù)增加給酶量會受到空間節(jié)點阻塞效果的影響,酶和載體的親和力降低,固定酶的酶活性降低。

圖3-2pH對固定化效果的影響

3.2.1.2pH對制備固定化酶的影響從圖3-2中可以看出,相對酶活力隨pH的增大呈先增加后減少的趨勢,且差異顯著(P<0.05),當pH=9.0時達到最高值。酶通過靜電吸附,固定在微球球面上,酶和載體表面的電特性都會受到環(huán)境的影響,從而影響酶與載體之間的有效結(jié)合。在固定過程....

圖3-3戊二醛濃度對固定化效果的影響

3.2.1.3戊二醛濃度對制備固定化酶的影響從圖3-3中可以看出,戊二醛濃度與相對酶活力成正比關(guān)系,且差異顯著(P<0.05)。戊二醛濃度為8%時,相對酶活力達到峰值。繼續(xù)增加戊二醛會使相對酶活力降低,這是因為過多的戊二醛本身就會引起水合物聚合,生成許多雜質(zhì)與納米粒子所結(jié)合,....

本文編號：3932465