目的建立重組酶聚合酶擴(kuò)增法（recombinasepolymeraseamplification,RPA）檢測瓶（桶）裝水中銅綠假單胞菌（Pseudomonasaeruginosa）的分析方法。方法通過基因組DNA提取、RPA擴(kuò)增反應(yīng)方法對樣品進(jìn)行檢測。結(jié)果該方法能夠在20 min內(nèi)特異地檢測出銅綠假單胞菌,方法檢出限為10 pg/μL銅綠假單胞菌基因組模板,對人工污染的水樣最低檢出限為36 CFU/mL,且重復(fù)性良好。結(jié)論本研究建立的RPA檢測方法能特異、準(zhǔn)確、高效地檢測出銅綠假單胞菌,而且操作簡單、耗時(shí)短,為瓶（桶）裝水中銅綠假單胞菌的快速診斷提供技術(shù)參考。 

【文章來源】：食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報(bào). 2020,11(19)

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

銅綠假單胞菌靈敏度實(shí)驗(yàn)結(jié)果(n=3)

6918食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報(bào)第11卷圖2銅綠假單胞菌特異性實(shí)驗(yàn)結(jié)果(n=3)Fig.2SpecificresultsofPseudomonasaeruginosa(n=3)3.3重復(fù)性以最低檢測模板濃度(10pg/μL),進(jìn)行3組平行實(shí)驗(yàn),驗(yàn)證RPA檢測方法的重復(fù)性。結(jié)果表明,3組平行均出現(xiàn)擴(kuò)增曲線,而空白對照和陰性對照無擴(kuò)增曲線(如圖3所示),說明RPA檢測方法具有較好的穩(wěn)定性。重復(fù)獨(dú)立檢測3次均取得一致性檢測結(jié)果。3.4人工污染樣品的檢測結(jié)果如圖4所示,人工污染銅綠假單胞菌的桶裝飲用水的檢測結(jié)果表明,當(dāng)污染量≥36CFU/mL,real-timeRPA即可在8～20min時(shí)檢出飲用水中的銅綠假單胞菌,全部反應(yīng)均可在20min內(nèi)完成。重復(fù)獨(dú)立檢測3次均取得一致結(jié)果。圖3銅綠假單胞菌重復(fù)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果(n=3)Fig.3RepetitiveresultsofPseudomonasaeruginosa(n=3)

6918食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報(bào)第11卷圖2銅綠假單胞菌特異性實(shí)驗(yàn)結(jié)果(n=3)Fig.2SpecificresultsofPseudomonasaeruginosa(n=3)3.3重復(fù)性以最低檢測模板濃度(10pg/μL),進(jìn)行3組平行實(shí)驗(yàn),驗(yàn)證RPA檢測方法的重復(fù)性。結(jié)果表明,3組平行均出現(xiàn)擴(kuò)增曲線,而空白對照和陰性對照無擴(kuò)增曲線(如圖3所示),說明RPA檢測方法具有較好的穩(wěn)定性。重復(fù)獨(dú)立檢測3次均取得一致性檢測結(jié)果。3.4人工污染樣品的檢測結(jié)果如圖4所示,人工污染銅綠假單胞菌的桶裝飲用水的檢測結(jié)果表明,當(dāng)污染量≥36CFU/mL,real-timeRPA即可在8～20min時(shí)檢出飲用水中的銅綠假單胞菌,全部反應(yīng)均可在20min內(nèi)完成。重復(fù)獨(dú)立檢測3次均取得一致結(jié)果。圖3銅綠假單胞菌重復(fù)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果(n=3)Fig.3RepetitiveresultsofPseudomonasaeruginosa(n=3)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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