α-瓊膠酶在功能性瓊膠寡糖的酶法制備中發(fā)揮著重要作用,目前有關(guān)α-瓊膠酶的研究較少。克隆表達(dá)了來自溶藻性吉爾維菌（Gilvimarinus agarilyticus）的α-瓊膠酶,命名為OUC-GaJJ96,并對其酶學(xué)性質(zhì)及水解產(chǎn)物進(jìn)行研究。該酶屬于糖苷水解酶96家族,基因全長為3 759 bp,編碼1 252個氨基酸,N端含有26個氨基酸編碼的信號肽,蛋白分子質(zhì)量約為180 kDa。酶學(xué)性質(zhì)研究顯示:OUC-GaJJ96最適反應(yīng)溫度和最適反應(yīng)pH值分別為30℃和7.0（Tris-HCl緩沖液）,比酶活力為2.68 U/mg。通過高效液相色譜和電噴霧離子源質(zhì)譜對OUC-GaJJ96的水解產(chǎn)物進(jìn)行分析,結(jié)果表明:該酶水解產(chǎn)物是瓊二糖、瓊四糖和瓊六糖,其中瓊四糖是主要產(chǎn)物,OUC-GaJJ96可用于制備具有生物活性的瓊膠寡糖。 

【文章來源】：食品科學(xué)技術(shù)學(xué)報. 2020,38(06)北大核心CSCD

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【部分圖文】：

搖OUC-GaJJ96進(jìn)化樹分析Fig.1搖PhylogeneticanalysisofOUC-GaJJ96搖2郾2搖OUC-GaJJ96蛋白的表達(dá)及純化結(jié)果

預(yù)測蛋白分子質(zhì)量為136郾1kDa。2郾3搖酶學(xué)性質(zhì)分析OUC-GaJJ96酶學(xué)性質(zhì)研究結(jié)果見圖3。圖3(a)及圖3(b)表明:OUC-GaJJ96在30益、pH值為7郾0(Tris-HCl緩沖液)的環(huán)境中表現(xiàn)出最高酶活力,與已報道的琢鄄瓊膠酶相似。Lee等[19]報道的琢鄄瓊膠酶AgaWS5在40益、pH值為8郾0的環(huán)境中表現(xiàn)出最高酶活力,且具有獨特的耐寒性,在10益可保留超過40%的最高酶活力;Liu等[18]報道的M:標(biāo)準(zhǔn)蛋白Marker;1:粗酶蛋白;2:純化的蛋白。圖2搖OUC-GaJJ96蛋白純化的SDS-PAGE分析結(jié)果Fig.2搖SDS-PAGEanalysisofOUC-GaJJ96搖琢鄄瓊膠酶CaLJ96最適反應(yīng)溫度和pH值分別為37益、7郾0;Ohta等[16]報道的琢鄄瓊膠酶AgaA33最適反應(yīng)溫度和pH值分別為45益、8郾5,可在40益環(huán)境中30min內(nèi)保持穩(wěn)定;Potin等[15]報道的琢鄄瓊膠酶AgaA最適反應(yīng)溫度和pH值分別為42郾5益、7郾2,在低于30益的環(huán)境中保存幾天后仍有酶活力,溫度超05食品科學(xué)技術(shù)學(xué)報搖搖搖搖搖搖搖搖搖搖搖搖搖搖搖搖搖2020年11月

圖4搖OUC-GaJJ96水解產(chǎn)物的HPLC分析結(jié)果Fig.4搖HPLCanalysisofhydrolysisproductsofagarosehydrolyzedbyOUC-GaJJ96搖圖5搖OUC-GaJJ96水解產(chǎn)物ESI-MS分析結(jié)果Fig.5搖ESI-MSanalysisofhydrolysisproductsofagarosehydrolyzedbyOUC-GaJJ96搖2郾68U/mg,在30益、pH值為7郾0(Tris-HCl緩沖液)條件下顯示出最高酶活力,主要水解產(chǎn)物為瓊四糖。OUC-GaJJ96除可用于偶數(shù)瓊寡糖標(biāo)品的制備外,參考茁鄄瓊膠酶與琢鄄新瓊二糖水解酶結(jié)合制備奇數(shù)低聚合度瓊寡糖的方法及Yang等[21]的研究,可將OUC-GaJJ96與茁鄄半乳糖苷酶AgWH2A結(jié)合制備奇數(shù)新瓊寡糖。通過對OUC-GaJJ96最適反應(yīng)溫度和pH值的考察,得到最佳反應(yīng)條件,結(jié)合水解產(chǎn)25食品科學(xué)技術(shù)學(xué)報搖搖搖搖搖搖搖搖搖搖搖搖搖搖搖搖搖2020年11月


本文編號：3333793