建立了測(cè)定嬰幼兒營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化奶粉中5種核苷酸含量的高效液相色譜法。樣品經(jīng)堿性磷酸酯酶水解,將核苷酸轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的核苷,采用硼酸凝膠吸附凈化,使用Boston pHlex ODS色譜柱（250 mm×4.6 mm,5.0μm）分離,流動(dòng)相A為含2 mmol/L 1-己烷磺酸鈉的20.9 mmol/L NH₄Ac（pH為4.3）;流動(dòng)相B為6.0%乙腈-離子對(duì)試劑（含2 mmol/L 1-己烷磺酸鈉的20.9 mmol/L NH₄Ac,pH為4.3）,梯度洗脫后,二極管陣列檢測(cè)器檢測(cè),檢測(cè)波長(zhǎng)為260 nm,內(nèi)標(biāo)法定量。結(jié)果表明,5種核苷在線性范圍內(nèi)相關(guān)性好,相關(guān)系數(shù)R²大于0.999;5種核苷酸的回收率在80.00%～111.23%范圍,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在1.8%～6.3%之間。檢出限為0.4～1.0 mg/kg,定量限為1.0～3.0 mg/kg。該方法凈化效果顯著,分離效果好,是嬰幼兒營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化奶粉中5種核苷酸的有效檢測(cè)方法。 

【文章來(lái)源】：分析科學(xué)學(xué)報(bào). 2020,36(06)北大核心CSCD

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【部分圖文】：

7種核苷混合標(biāo)準(zhǔn)溶液高效液相色譜圖

樣品溶液中7種核苷高效液相色譜圖

核苷酸帶有磷酸基團(tuán),酸性強(qiáng),極性大,降低被測(cè)樣品分子的極性,在常規(guī)色譜柱上保留能力比較差,目標(biāo)物和雜質(zhì)不能有效分離。雖然文獻(xiàn)也有報(bào)道采用HILIC模式[18]進(jìn)行分離,但是由于其強(qiáng)極性樣品很難進(jìn)行有效的凈化。而核苷相對(duì)于核苷酸其分子的極性較弱,在堿性磷酸酶催化下脫去核苷酸上的磷酸基團(tuán),水解核苷酸生成核苷,降低了檢測(cè)的目標(biāo)物的極性,有效增加了使各化合物在色譜柱上的保留時(shí)間,如圖3所示,腺嘌呤核苷酸在堿性磷酸酯酶作用下水解為腺嘌呤核苷,從而降低了極性。采用水解法將核苷酸水解成為核苷后,雖然降低了極性,但是乳粉基質(zhì)復(fù)雜且添加了各種營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化劑,僅采用蛋白質(zhì)沉淀法達(dá)不到很好的效果,采用凝膠對(duì)復(fù)雜基質(zhì)樣品中核苷進(jìn)行吸附清洗后,再將目標(biāo)核苷釋放出來(lái),達(dá)到了富集和凈化目的,從而排除基質(zhì)的干擾能夠準(zhǔn)確的測(cè)定核苷的含量,從而間接準(zhǔn)確測(cè)得核苷酸的含量。在檢測(cè)過(guò)程中采用了內(nèi)標(biāo)法進(jìn)行定量,進(jìn)一步提高了定量的準(zhǔn)確性。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3293208