本文關(guān)鍵詞：仿刺參（Apostichopus japonicas）腸道再生期巨大芽孢桿菌對(duì)生長(zhǎng)、免疫、消化及腸道菌群的作用

  更多相關(guān)文章： 仿刺參 腸道再生 巨大芽孢桿菌 燦爛弧菌 免疫反應(yīng) 消化酶

【摘要】：本論文采用傳統(tǒng)平板涂布計(jì)數(shù)法結(jié)合HiSeq2000高通量16S rDNA序列分析技術(shù)研究在仿刺參腸道再生過(guò)程中巨大芽孢桿菌H1對(duì)其腸道菌群的影響。同時(shí)通過(guò)分析仿刺參腸道相關(guān)免疫酶活(酸性磷酸酶、堿性磷酸酶和超氧化物歧化酶)和消化酶活(蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶)、生長(zhǎng)指標(biāo)(體重和特定生長(zhǎng)率)等,結(jié)合燦爛弧菌人工拮抗試驗(yàn),進(jìn)一步研究巨大芽孢桿菌H1對(duì)腸道再生期仿刺參生長(zhǎng)、免疫和消化的作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明巨大芽孢桿菌H1能夠顯著減少仿刺參腸道的弧菌數(shù)量；降低因病原弧菌引起的仿刺參排臟率；對(duì)仿刺參幼參具有很好的保護(hù)作用,其排臟保護(hù)率可達(dá)92.31%；同時(shí)提高仿刺參的特定生長(zhǎng)率3.00±0.34倍。以上研究為巨大芽孢桿菌H1在仿刺參保苗養(yǎng)殖中的廣泛應(yīng)用提供了科學(xué)依據(jù)。所獲得的主要研究結(jié)果如下：1.采用HiSeq2000高通量及傳統(tǒng)平板涂布計(jì)數(shù)法發(fā)現(xiàn)：仿刺參幼參正常腸道細(xì)菌種類(lèi)主要分布于變形菌門(mén)、浮霉菌門(mén)、放線菌門(mén)、厚壁菌門(mén)、疣微菌門(mén)、綠彎菌門(mén)、酸桿菌門(mén)等,其中變形菌門(mén)所占比例最大。腸道菌群是波動(dòng)的,但是均以Y-變形菌綱為優(yōu)勢(shì)菌群,且其所占比例有不斷增加的趨勢(shì)。仿刺參正常腸道細(xì)菌的種類(lèi)比再生期的更為豐富。2.由于發(fā)生排臟,再生期仿刺參腸道除變形菌門(mén)和擬桿菌門(mén),其他種類(lèi)細(xì)菌所占比重較小,γ-變形菌綱在再生的不同階段其所占的比例均在70%以上。巨大芽孢桿菌H1影響再生腸道菌群的結(jié)構(gòu),實(shí)驗(yàn)組A(加巨大芽孢桿菌H1)的芽孢桿菌數(shù)量一直顯著高于空白對(duì)照組C和實(shí)驗(yàn)組B(不加巨大芽孢桿菌H1)(P0.05),在再生后期(第25天)實(shí)驗(yàn)組A、實(shí)驗(yàn)組B及空白對(duì)照組C可培養(yǎng)的弧菌數(shù)量分別占可培養(yǎng)的總異養(yǎng)菌數(shù)79.15%、91.52%、71.17%。說(shuō)明H1在仿刺參再生腸道內(nèi)能有效定植(可達(dá)107CFU/g),并顯著抑制弧菌的生長(zhǎng)(P0.05)。3.分析了仿刺參腸道相關(guān)免疫酶活(酸性磷酸酶、堿性磷酸酶和超氧化物歧化酶)和消化酶活(蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶),發(fā)現(xiàn)腸道再生初期的酸性磷酸酶ACP和堿性磷酸酶AKP水平均顯著低于正常腸道,伴隨著腸道再生,ACP和AKP水平逐漸提高,趨于正常水平。巨大芽孢桿菌Hl在再生初期對(duì)仿刺參腸道ACP和AKP具有一定抑制作用,但在再生后期具有顯著促進(jìn)ACP和AKP水平的作用(P0.05)。不同于ACP和AKP,再生期腸道SOD水平顯著高于正常腸道,可能是再生初期仿刺參的一種自我保護(hù)。之后SOD水平隨著腸道再生不斷降低,接近于正常腸道的SOD活性。同樣,巨大芽孢桿菌Hl在再生初期對(duì)仿刺參腸道SOD具有一定抑制作用。巨大芽孢桿菌H1對(duì)再生期仿刺參腸道蛋白酶和淀粉酶具有顯著促進(jìn)作用(P0.05),但是只在再生初期顯著提高仿刺參腸道脂肪酶活性(P0.05)。4.處于腸道再生初期的仿刺參幼參其體質(zhì)量顯著下降,呈負(fù)生長(zhǎng)狀態(tài)。但在第10天,隨著發(fā)現(xiàn)糞便的產(chǎn)生,表明幼參已初具消化能力且體重開(kāi)始緩慢的上升,并在第12天呈正生長(zhǎng)。水體中添加105 CFU/ml的巨大芽孢桿菌H1可顯著促進(jìn)仿刺參腸道再生期仿刺參特定生長(zhǎng)率并增重(P0.05)。說(shuō)明巨大芽孢桿菌H1可顯著促進(jìn)腸道再生期仿刺參的生長(zhǎng)。5.在巨大芽孢桿菌H1 (5×106CFU/ml)人工拮抗?fàn)N爛弧菌(107CFU/ml)實(shí)驗(yàn)中,證實(shí)了巨大芽孢桿菌Hl具有很好的保護(hù)仿刺參幼參的作用,其保護(hù)率為92.31%。其中陽(yáng)性對(duì)照組的排臟率為(43.33±5.77)%,拮抗組的排臟率僅為(3.33±2.89)%,兩者差異極顯著(P0.01)。由此可見(jiàn),巨大芽孢桿菌H1在仿刺參養(yǎng)殖中將有良好的應(yīng)用前景。
【關(guān)鍵詞】：仿刺參 腸道再生 巨大芽孢桿菌 燦爛弧菌 免疫反應(yīng) 消化酶
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)海洋大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：S917.4
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-12
• 第一章 文獻(xiàn)綜述12-23
• 1. 仿刺參的分類(lèi)地位及作用12
• 2. 仿刺參養(yǎng)殖現(xiàn)狀12
• 3. 仿刺參特殊的生理特征12-14
• 3.1 休眠12-13
• 3.2 排臟13
• 3.3 再生13-14
• 4. 仿刺參再生期的免疫特征14-15
• 5. 仿刺參腸道消化酶的特征15
• 6. 仿刺參腸道菌群的特征15-16
• 7. 芽孢桿菌在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的應(yīng)用16-19
• 7.1 芽孢桿菌在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的作用16-18
• 7.2. 巨大芽孢桿菌生物學(xué)特征及應(yīng)用18-19
• 8. 高通量測(cè)序技術(shù)應(yīng)用于微生物生態(tài)研究19-21
• 8.1 高通量測(cè)序與傳統(tǒng)微生物培養(yǎng)方法的比較20
• 8.2 高通量測(cè)序與變性梯度凝膠電泳的比較20
• 8.3 16S rDNA通用引物的選擇20-21
• 9. 本論文研究的目的及意義21-23
• 第二章 仿刺參腸道再生期間菌群結(jié)構(gòu)的研究23-33
• 前言23-24
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料和儀器24-25
• 2.1.1 仿刺參幼參和菌株24
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器24-25
• 2.1.3 實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基配制25
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法25-27
• 2.2.1 仿刺參腸道菌群DNA的提取與檢測(cè)25-26
• 2.2.2 16S rDNA-V4片段的擴(kuò)增及高通量測(cè)序26
• 2.2.3 稀釋平板涂布法分析仿刺參腸道再生期腸道主要菌群26-27
• 2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果27-31
• 2.3.1 高通量測(cè)序分析仿刺參正常腸道與再生期腸道菌群結(jié)構(gòu)27-30
• 2.3.2 稀釋平板涂布法分析仿刺參腸道再生期腸道主要菌群30-31
• 2.4 討論31-33
• 第三章 仿刺參腸道再生期間腸道免疫及消化能力的研究33-48
• 3.1 實(shí)驗(yàn)材料和儀器33-34
• 3.1.1 仿刺參幼參和菌株33-34
• 3.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器34
• 3.2. 實(shí)驗(yàn)方法34-42
• 3.2.1 蛋白定量測(cè)定的方法34-35
• 3.2.2 堿性磷酸酶(AKP)的測(cè)定方法35
• 3.2.3 酸性磷酸酶(ACP)的測(cè)定方法35-36
• 3.2.4 總超氧化物歧化酶(T-SOD)測(cè)定方法36-37
• 3.2.5 蛋白酶的測(cè)定方法37-39
• 3.2.6 脂肪酶活力的測(cè)定39-40
• 3.2.7 淀粉酶活力的測(cè)定40-42
• 3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果42-46
• 3.3.1 仿刺參腸道再生期腸道酸性磷酸酶ACP的比活力變化42
• 3.3.2 仿刺參腸道再生期腸道堿性磷酸酶AKP的比活力變化42-43
• 3.3.3 仿刺參腸道再生期中腸道超氧化物歧化酶SOD的比活力變化43
• 3.3.4 仿刺參腸道再生期腸道蛋白酶的比活力變化43-44
• 3.3.5 仿刺參腸道再生期腸道淀粉酶的比活力變化44-45
• 3.3.6 仿刺參腸道再期腸道脂肪酶的比活力變化45-46
• 3.4 討論46-48
• 第四章 仿刺參腸道再生期的生長(zhǎng)及燦爛弧菌拮抗實(shí)驗(yàn)48-54
• 4.1 實(shí)驗(yàn)材料和儀器48-49
• 4.1.1 仿刺參幼參和菌株48
• 4.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器48-49
• 4.2 實(shí)驗(yàn)方法49
• 4.2.1 仿刺參腸道再生期的生長(zhǎng)和特定生長(zhǎng)率的測(cè)定49
• 4.2.2 燦爛弧菌人工拮抗試驗(yàn)49
• 4.3 結(jié)果49-52
• 4.3.1 仿刺參腸道再生對(duì)體重和特定生長(zhǎng)率的影響49-51
• 4.3.2 仿刺參腸道再生期(第10天)腸道解剖圖51
• 4.3.3 燦爛弧菌人工拮抗試驗(yàn)51-52
• 4.4 討論52-54
• 論文總結(jié)54-56
• 參考文獻(xiàn)56-61
• 致謝61-62
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷62-63
• 發(fā)表的學(xué)術(shù)論文63

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本文編號(hào)：960475