本文關鍵詞：視黃醇對仔豬睪丸支持細胞體外生物學特性的影響

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【摘要】：視黃醇及其代謝產物是雄性動物睪丸發(fā)育和精子發(fā)生所必需的物質。支持細胞是睪丸內視黃醇作用的靶細胞,為生精細胞發(fā)育和成熟提供特有的微環(huán)境。本試驗以分離自3-5周齡仔豬睪丸的支持細胞為材料,采用RT-PCR、CCK-8、ELISA檢測支持細胞內增殖和凋亡相關基因、細胞因子的表達,分析視黃醇對仔豬睪丸支持細胞增殖、凋亡和表達細胞因子的影響,獲得如下結果：1仔豬支持細胞的分離培養(yǎng)和鑒定經比較3組酶消化法所獲得細胞數量、細胞活率和GATA-4 mRNA相對表達量,結果顯示,先以0.25%膠原酶IV和0.1%透明質酸酶,37°C消化60 min,再以0.25%胰酶和0.1%DNase I,37°C消化20 min,有利于支持細胞的富集。于貼壁不同時間收集細胞,分析懸浮細胞和貼壁細胞中GATA-4 mRNA相對表達量,結果顯示,支持細胞在2h內不貼壁,貼壁時間主要分布在3-5 h。采用差異貼壁和低滲處理后純化細胞,形態(tài)不規(guī)則,胞體寬大,細胞核呈卵圓或不規(guī)則形；GATA4染色呈陽性,堿性磷酸酶染色呈陰性；RT-PCR檢測結果顯示,純化后細胞表達支持細胞標記GATA4、 SOX9、INHB,不表達間質細胞標記CYP17、3β-HSD和管周細胞標記α-SMA,符合支持細胞的驀本特征；經ELISA檢測顯示,本試驗所分離支持細胞表達GDNF、LIF、 CSF-1、FGF2、EGF,而SCF未檢出。2視黃醇對支持細胞增殖和凋亡的影響分別在培養(yǎng)基中添加0.005 μmol/L、0.025 μmol/L、0.125 μmol/L、0.625μmol/L、 1.25μmol/L、2.5μmol/L、5μmol/L和10μmol/L視黃醇,短期培養(yǎng)(24 h)和長期培養(yǎng)(3d)后,經CCK-8檢測支持細胞活性,結果如下：培養(yǎng)24h,視黃醇濃度低于5μmol/L,對支持細胞的活性沒有顯著影響,而濃度達到5μmol/L顯著抑制支持細胞活性,表明5μmol/L及以上濃度的視黃醇對支持細胞具有顯著的細胞毒性效應；培養(yǎng)3d,視黃醇濃度低于為0.005μmol/L和0.025μmol/L時對支持細胞活性無顯著影響,視黃醇濃度為0.125μmol/L和0.625μmol/L時顯著抑制支持細胞活性(P0.05),濃度達到1.25μmol/L時表現極顯著抑制(P0.01)。短期培養(yǎng)和長期培養(yǎng)結果顯示,視黃醇的作用具有時效性和劑量依賴性。實驗選取1.25 μmol/L作為視黃醇的試驗濃度,應用RT-PCR檢測分析視黃醇對細胞增殖(PCNA、C-MYC和BCL-2)和凋亡相關基因(CASP3和BAX)表達的影響,結果顯示：視黃醇組增殖相關基因的表達量顯著低于對照組,凋亡相關基因的表達量顯著高于對照組。結果表明視黃醇通過抑制支持細胞內增殖相關基因表達,促進凋亡相關基因表達,進而抑制支持細胞增殖。3視黃醇對支持細胞分泌細胞因子的影響在培養(yǎng)基中添加1.25 μmol/L視黃醇,應用RT-PCR分析和ELISA檢測分析視黃醇對支持細胞表達細胞因子的影響,RT-PCR分析顯示,視黃醇顯著抑制支持細胞內GDNF、CSF-1和EGF mRNA表達,對LIF和FGF2 mRNA表達沒有顯著影響；經ELISA檢測,視黃醇顯著抑制支持細胞中GDNF、LIF、CSF-1、FGF2、EGF蛋白的表達。綜上所述,視黃醇具有抑制支持細胞內增殖相關基因表達,促進凋亡相關基因表達,和抑制支持細胞合成和分泌細胞因子的作用,進而降低支持細胞活性,抑制支持細胞增殖。
【關鍵詞】：豬 睪丸 支持細胞 視黃醇
【學位授予單位】：四川農業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：S828
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• Abstract7-9
• 縮略詞表9-12
• 第一章 支持細胞生物學特性以及應用研究和視黃醇對雄性生殖的影響的研究現狀12-23
• 1 睪丸支持細胞的生物學特性和研究現狀12-19
• 1.1 支持細胞發(fā)育12-13
• 1.2 支持細胞的形態(tài)和結構特點13-14
• 1.3 支持細胞的功能14-17
• 1.4 支持細胞的分離鑒定17-18
• 1.5 支持細胞的應用探索18-19
• 2 視黃醇及其代謝產物在雄性生殖中的作用19-22
• 2.1 視黃酸與雄性生殖19-22
• 2.2 視黃醇對支持細胞的影響的研究現狀22
• 3 研究的目的意義22-23
• 第二章 仔豬睪丸支持細胞分離、純化和鑒定23-38
• 1 材料23-24
• 1.1 試驗材料23
• 1.2 主要試劑23
• 1.3 主要試劑配制23-24
• 2 方法24-29
• 2.1 分離24-25
• 2.2 支持細胞貼壁性質分析和純化25
• 2.3 鑒定25-26
• 2.4 RT-PCR26-27
• 2.5 支持細胞的傳代和生長曲線繪制27-28
• 2.6 ELISA檢測部分細胞因子的表達28
• 2.7 支持細胞的凍存和復蘇28-29
• 2.8 數據統(tǒng)計29
• 3 結果29-35
• 3.1 不同消化方法的分離效率比較29-30
• 3.2 支持細胞貼壁性質分析和純化30-31
• 3.3 持細胞的鑒定31-32
• 3.4 支持細胞的傳代培養(yǎng)和生長去曲線繪制32-34
• 3.5 ELISA檢測分析細胞因子的表達34-35
• 3.6 支持細胞的凍存和復蘇35
• 4 討論35-37
• 5 小結37-38
• 第三章 視黃醇對支持睪丸支持細胞體外生物學特性的影響38-50
• 1 材料38-39
• 1.1 試驗材料38
• 1.2 主要試劑38-39
• 2 方法39-42
• 2.1 視黃醇對支持細胞增殖的影響39-41
• 2.2 視黃醇對支持細胞分泌細胞因子的影響41
• 2.3 數據統(tǒng)計41-42
• 3. 結果42-47
• 3.1 視黃醇作用濃度分析42-43
• 3.2 視黃醇對支持細胞增殖的影響43-44
• 3.3 視黃醇對支持細胞表達細胞因子的影響44-47
• 4 討論47-48
• 5 小結48-50
• 結論50-51
• 參考文獻51-62
• 致謝62-63
• 碩士期間發(fā)表論文63

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1 郭杰;方南洙;李鐘淑;任利強;;睪丸支持細胞結構、功能及研究進展[J];畜牧獸醫(yī)雜志;2008年01期

2 周銀濤;王鮮忠;周玉蘭;趙伯川;陳永軍;張家驊;;仔豬睪丸支持細胞的增殖與發(fā)育[J];農業(yè)生物技術學報;2011年01期

3 孫秀娟;韓輝;;動物支持細胞的研究進展[J];當代畜牧;2011年11期

4 夏凡,李青旺,韓增勝,陳曉宇,龍玲;成年兔睪丸支持細胞的分離純化[J];中國農學通報;2005年05期

5 葛秀國;張偉;丁向彬;李吉霞;;成年犬睪丸支持細胞體外分離培養(yǎng)的研究[J];黑龍江畜牧獸醫(yī);2014年15期

6 吳仲恒;莊瑞宏;張盈盈;陳義洲;;犬支持細胞瘤引起雙側睪丸多發(fā)性囊腫一例[J];廣東畜牧獸醫(yī)科技;2009年01期

7 張明;鄔靜;袁慧;鄧思君;袁莉蕓;郭成志;朱麗;;鎘誘導仔豬睪丸支持細胞氧化酶活性降低及DNA的損傷[J];中國獸醫(yī)學報;2010年06期

8 劉輝;田惠萍;崔定中;成正邦;夏洛浚;;牦牛、黃牛、犏牛的垂體、間質細胞和支持細胞的比較[J];中國牦牛;1990年03期

9 張靜;周智慧;鄒海軍;王杏龍;;成年公兔睪丸支持細胞的分離純化及鑒定[J];中國畜牧獸醫(yī);2007年05期

10 劉闖;趙曉娥;馬保華;孫冰潔;;新生犢牛睪丸支持細胞的高效分離培養(yǎng)與鑒定[J];西北農林科技大學學報(自然科學版);2010年01期

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1 陳小玉;;睪丸支持細胞功能研究進展[A];中國環(huán)境誘變劑學會致癌專業(yè)委員會09年學術會議論文匯編[C];2009年

2 葉世雋;陳詠梅;;支持細胞中微絲對精子發(fā)生調控的研究[A];中國動物學會全國顯微與亞顯微形態(tài)科學（細胞及分子顯微技術科學）分會第十一次學術研討會論文摘要集[C];2002年

3 采克俊;張易祥;丁海雷;丁志麗;張念慈;劉莉;;18天雞胚睪丸支持細胞的分離純化與鑒定[A];中國細胞生物學學會第九次會員代表大會暨青年學術大會論文摘要集[C];2007年

4 鄭明華;林海龍;陳永平;;睪丸支持細胞與移植[A];2008年浙江省感染病、肝病學術年會論文匯編[C];2008年

5 吳應積;羅奮華;旭日干;;絨山羊睪丸支持細胞與生殖細胞的長期培養(yǎng)和觀察[A];第十屆全國生殖生物學學術研討會論文摘要集[C];2005年

6 周莉;吳純啟;馬華智;廖明陽;;羥基脲對大鼠Sertoli-germ細胞共培養(yǎng)的影響[A];2006年全國藥物毒理學會議論文集[C];2006年

7 周銀濤;王鮮忠;周玉蘭;趙伯川;陳永軍;張家驊;;仔豬睪丸組織在出生后早期細胞增殖能力變化[A];中國畜牧獸醫(yī)學會獸醫(yī)產科學分會第五屆全體會議第十次學術研討會論文集[C];2009年

8 孔慶學;江紅;段翠密;李洪波;吳靖芳;韓曉明;王常勇;;微重力條件下胰島與睪丸支持細胞共培養(yǎng)的實驗研究[A];提高全民科學素質、建設創(chuàng)新型國家——2006中國科協年會論文集（下冊）[C];2006年

9 鄭明華;林海龍;陳永平;;睪丸支持細胞與移植[A];第十次浙江省中西醫(yī)結合肝病學術會議論文匯編[C];2008年

10 米美玲;鄒挺;楊蓓;熊明娣;王晶磊;徐斯凡;;睪丸支持細胞與大鼠海馬細胞培養(yǎng)作用的初步研究[A];Proceedings of the 7th Biennial Meeting and the 5th Congress of the Chinese Society for Neuroscience[C];2007年

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1 李天舒;干細胞功能下降可致人類衰老[N];健康報;2007年

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1 張勇;缺氧對于大鼠原代支持細胞的損傷作用和機制研究[D];華中科技大學;2013年

2 江小華;支持細胞依賴的結構和功能對小鼠生殖細胞發(fā)育影響的研究[D];中國科學技術大學;2014年

3 周德榮;棉酚對睪丸支持細胞間隙連接蛋白43表達的調節(jié)作用的研究[D];汕頭大學;2009年

4 邱志群;鄰苯二甲酸二丁酯和苯并[a]芘對大鼠睪丸支持細胞的聯合毒性研究[D];第三軍醫(yī)大學;2008年

5 汪秀星;兒童時期腮腺炎病毒感染導致成年男性不育與支持細胞的蛋白質異戊二烯化修飾的改變相關[D];南京大學;2013年

6 宋楊;P，p'-DDE誘導ROS在線粒體和MAPK信號轉導通路中的作用[D];華中科技大學;2009年

7 張順;MTA2在睪丸支持細胞中的表達及功能研究[D];第四軍醫(yī)大學;2013年

8 張明;鎘誘導仔豬睪丸支持細胞凋亡及機理研究[D];湖南農業(yè)大學;2010年

9 李潔;雄性小鼠睪丸支持細胞中Attractin的功能研究[D];華中科技大學;2009年

10 季佳佳;CS_2致男（雄）性下丘腦—垂體—性腺軸功能紊亂機制初探及NO的干預作用[D];華中科技大學;2011年

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1 張會瓊;TNF-α對體外培養(yǎng)仔豬睪丸支持細胞中Fas/FasL表達的調節(jié)[D];西南大學;2015年

2 張連杰;氟對睪丸支持細胞免疫豁免功能的影響及其機制研究[D];山西農業(yè)大學;2015年

3 劉元;小鼠p27~(kip1)的SUMO化修飾對睪丸支持細胞細胞周期的影響研究[D];華中農業(yè)大學;2015年

4 聶慶麗;氟對睪丸支持細胞與淋巴細胞共培養(yǎng)中FasL誘導淋巴細胞凋亡的影響[D];山西農業(yè)大學;2015年

5 李玉龍;FSH對支持細胞增殖相關基因表達的影響[D];東北農業(yè)大學;2015年

6 黃巍;圍生期BPA暴露對小鼠精液參數及睪丸支持細胞連接蛋白表達的影響[D];青島大學;2015年

7 鄭王龍;玉米赤霉烯酮對大鼠睪丸支持細胞骨架及功能蛋白ABP等分泌的影響[D];揚州大學;2015年

8 劉歡歡;視黃醇對仔豬睪丸支持細胞體外生物學特性的影響[D];四川農業(yè)大學;2015年

9 武海軍;犢牛睪丸支持細胞的分離培養(yǎng)及其對淋巴細胞的影響[D];西北農林科技大學;2007年

10 王冰冰;五味子中殘留農藥對睪丸支持細胞的毒性研究[D];哈爾濱商業(yè)大學;2013年

，

本文編號：833528