本文關(guān)鍵詞：副豬嗜血桿菌分型血清的制備及四川地區(qū)血清流行病學(xué)調(diào)查

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【摘要】：副豬嗜血桿菌病是由副豬嗜血桿菌(Haemophilus parasuis, HP S)引起豬的一種接觸性細(xì)菌性傳染病,嚴(yán)重威脅著養(yǎng)豬業(yè)的健康發(fā)展。長期以來,HPS血清型復(fù)雜,分型血清制備較困難,方法不標(biāo)準(zhǔn),為有利于本病的病原學(xué)診斷,本試驗采用HPS的15個血清型標(biāo)準(zhǔn)菌株制備免疫原免疫健康雄性家兔,成功制備HPS分型血清,并選用瓊脂擴(kuò)散試驗對四川地區(qū)HPS田間分離株進(jìn)行血清型鑒定,旨在從病原學(xué)角度對四川地區(qū)HPS優(yōu)勢血清型的流行情況以及血清型的分布規(guī)律進(jìn)行調(diào)查,為四川地區(qū)該病的針對性防控提供科學(xué)依據(jù)。1.HPS分型血清制備的免疫程序的優(yōu)化篩選從澳大利亞昆士蘭州動物研究所購買HPS的15個血清型的標(biāo)準(zhǔn)菌株,對標(biāo)準(zhǔn)菌株進(jìn)行復(fù)蘇與鑒定,進(jìn)一步證實標(biāo)準(zhǔn)菌株的準(zhǔn)確性,為分型血清的制備奠定基礎(chǔ)。通過對本實驗室原有免疫程序進(jìn)行優(yōu)化,優(yōu)化后的免疫程序提高了菌液免疫次數(shù),縮短了免疫間隔時間,降低了免疫劑量,同時基礎(chǔ)免疫之前增加了免疫誘導(dǎo)。采用優(yōu)化后的免疫程序進(jìn)行HPS5型分型血清的制備,同時以文獻(xiàn)報道的3種不同的免疫程序作為對照組,免疫結(jié)束后心臟采血,并分離血清,對血清采用瓊脂擴(kuò)散試驗進(jìn)行特異性檢測,采用IHA試劑盒進(jìn)行抗體效價檢測。結(jié)果表明：血清特異性良好,試驗組與對照組家兔血清通過瓊脂擴(kuò)散試驗均能產(chǎn)生明顯沉淀線,空白對照組瓊脂擴(kuò)散試驗未產(chǎn)生沉淀線,并且試驗組血清抗體效價達(dá)1：32,均高于3個對照組,因此,優(yōu)化后的免疫程序可推廣用于HPS其它血清型分型血清的制備。2.HPS分型血清的制備及其臨床應(yīng)用利用HPS的15個血清型的標(biāo)準(zhǔn)菌株制備免疫原,采用優(yōu)化后的免疫程序通過皮下注射與耳緣靜脈注射免疫原的方式免疫健康雄性家兔,免疫結(jié)束后采集心血并分離血清,對血清進(jìn)行特異性與抗體效價檢測,結(jié)果表明血清特異性良好,抗體效價均達(dá)到1：8以上,用于HPS田間分離菌株的血清型鑒定取得良好效果。本實驗室2013年至2014年,從四川22個市區(qū)80個豬場中共采集498份病料,從這些病料中共分離出80株HPS。采用瓊脂擴(kuò)散試驗對所有分離株進(jìn)行血清型鑒定,所分離的80株HPS中血清4型占28.75%(23/80)、5型占35.00%(28/80)、12型占6.25%(5/80)、13型占7.50%(6/80)、15型占1.25%(1/80)、不能分型的菌株占21.25%(17/80),結(jié)果表明血清型4、5、12、13為四川地區(qū)主要流行的血清型,這一結(jié)果為四川地區(qū)防控HPS提供了科學(xué)依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：副豬嗜血桿菌 免疫程序 血清制備 流行病學(xué)
【學(xué)位授予單位】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S858.28
【目錄】：

• 中文摘要4-5
• ABSTRACT5-7
• 符號說明7-12
• 第一章 文獻(xiàn)綜述12-22
• 1 副豬嗜血桿菌病12
• 2 病原學(xué)研究12-16
• 2.1 形態(tài)特征12
• 2.2 培養(yǎng)特性研究12-13
• 2.3 副豬嗜血桿菌的分型研究13-14
• 2.3.1 血清學(xué)分型13-14
• 2.3.2 基因型分型14
• 2.4 副豬嗜血桿菌的毒力研究14-16
• 2.4.1 清型與毒力的關(guān)系14-15
• 2.4.2 主要毒力因子15-16
• 3 流行病學(xué)研究16-18
• 3.1 宿主感染情況16
• 3.2 副豬嗜血桿菌的混合感染情況16-17
• 3.3 副豬嗜血桿菌的血清學(xué)流行病學(xué)17-18
• 3.4 副豬嗜血桿菌的耐藥性研究18
• 4 副豬嗜血桿菌病的診斷與防治18-20
• 4.1 臨床診斷18-19
• 4.2 病原學(xué)診斷19
• 4.3 分子生物學(xué)診斷19-20
• 4.4 HPS的血清學(xué)診斷20
• 4.5 HPS的防治20
• 5 本研究的目的與意義20-22
• 第二章 HPS分型血清制備的免疫程序的優(yōu)化篩選22-38
• 1 材料22-23
• 1.1 試驗菌株與血清22
• 1.2 試驗動物22
• 1.3 主要試劑22-23
• 1.4 主要儀器設(shè)備23
• 1.5 主要培養(yǎng)基23
• 2 方法23-28
• 2.1 標(biāo)準(zhǔn)菌株的復(fù)蘇23-24
• 2.1.1 標(biāo)準(zhǔn)菌株的復(fù)蘇與培養(yǎng)23-24
• 2.1.2 革蘭氏染色觀察24
• 2.1.3 PCR鑒定24
• 2.2 免疫程序的篩選24-28
• 2.2.1 免疫原的制備24-25
• 2.2.1.1 HPS5型標(biāo)準(zhǔn)菌株的復(fù)蘇與培養(yǎng)24-25
• 2.2.1.2 細(xì)菌的滅活與檢驗25
• 2.2.1.3 細(xì)菌的濃縮25
• 2.2.1.4 抗原的乳化25
• 2.2.1.5 疫苗的檢驗25
• 2.2.2 免疫程序25-27
• 2.2.2.1 優(yōu)化后的免疫程序25-26
• 2.2.2.2 對照組的免疫程序26-27
• 2.2.3 血清抗體瓊脂擴(kuò)散試驗陽性時間的檢測27-28
• 2.2.4 血清抗體效價的檢測28
• 2.2.5 血清特異性的檢測28
• 3 結(jié)果28-35
• 3.1 標(biāo)準(zhǔn)菌株鑒定結(jié)果28-33
• 3.1.1 標(biāo)準(zhǔn)菌株的復(fù)蘇與培養(yǎng)結(jié)果28-29
• 3.1.2 革蘭氏染色鏡檢形態(tài)29-32
• 3.1.3 PCR鑒定結(jié)果32-33
• 3.2 血清檢測結(jié)果33-35
• 3.2.1 HPS5型血清瓊脂擴(kuò)散試驗陽性時間檢測結(jié)果33
• 3.2.2 血清抗體效價檢測結(jié)果33-34
• 3.2.3 血清特異性的檢測結(jié)果34-35
• 4 討論35-38
• 第三章 HPS15個血清型分型血清的制備及其臨床運用38-48
• 1 材料38-39
• 1.1 主要試劑38
• 1.2 試驗動物38
• 1.3 試驗菌株38
• 1.4 主要儀器設(shè)備38-39
• 2 方法39-42
• 2.1 HPS的分離鑒定39-41
• 2.1.1 病料采集39-40
• 2.1.2 HPS的分離鑒定40-41
• 2.2 HPS分型血清的制備41-42
• 2.2.1 免疫原的制備41
• 2.2.2 免疫程序41
• 2.2.3 血清抗體瓊脂擴(kuò)散試驗陽性時間的檢測41
• 2.2.4 血清抗體效價的檢測41
• 2.2.5 血清特異性的檢測41-42
• 2.3 HPS分型血清的臨床應(yīng)用42
• 3 試驗結(jié)果42-45
• 3.1 HPS分離鑒定結(jié)果42-43
• 3.2 血清瓊脂擴(kuò)散試驗陽性時間檢測結(jié)果43
• 3.3 血清抗體效價檢測結(jié)果43-44
• 3.4 血清特異性的檢測結(jié)果44
• 3.5 四川地區(qū)80株HPS血清型鑒定結(jié)果44
• 3.6 四川地區(qū)HPS血清型的流行情況及分布規(guī)律44-45
• 4 討論45-48
• 第四章 結(jié)論48-49
• 參考文獻(xiàn)49-56
• 致謝56

【相似文獻(xiàn)】

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本文編號：811157