本文關(guān)鍵詞：基于高通量測(cè)序技術(shù)的舞毒蛾幾丁質(zhì)降解相關(guān)基因分析

  更多相關(guān)文章： 舞毒蛾 幾丁質(zhì) 實(shí)時(shí)熒光定量PCR RNA干擾

【摘要】：舞毒蛾(Lymantria dispar)是世界上一種重要的農(nóng)業(yè)性害蟲,分布及其廣泛,而幾丁質(zhì)的代謝是舞毒蛾生長(zhǎng)發(fā)育過程中必不可少的。然而舞毒蛾基因信息的研究一直比較匱乏。論文對(duì)舞毒蛾轉(zhuǎn)錄組進(jìn)行了高通量測(cè)序以豐富舞毒蛾的基因信息,并從其轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫(kù)中檢索與幾丁質(zhì)降解相關(guān)酶的基因,研究其表達(dá)與功能。主要工作如下：(1)解剖舞毒蛾獲得其表皮與腸道等組織的混合物,提取其RNA進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測(cè)序,獲得了該物種36,882條unigenes,并將這些unigenes通過BLAST比對(duì)SWISS-PROT、TREMBL、CDD、PFAM、NR和KOG等數(shù)據(jù)庫(kù)注釋。(2)從舞毒蛾轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫(kù)中找出了與舞毒蛾幾丁質(zhì)降解相關(guān)酶的基因共七條：幾丁質(zhì)酶LdChtⅢ；幾丁質(zhì)脫乙�；窵dCdal, LdCda2, LdCda3與LdCda4; β-N-乙酰葡萄糖胺糖苷酶LdNag2與LdNag3。通過設(shè)計(jì)特異性引物,以實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)獲得的β-actin序列作為內(nèi)參基因,使用Real-time PCR方法,研究這些基因在舞毒蛾不同發(fā)育階段的相對(duì)表達(dá)量。(3)采用RNAi技術(shù)通過體外注射的方法以舞毒蛾6齡幼蟲、預(yù)蛹以及蛹為研究對(duì)象,研究基因功能。研究表明：各類降解幾丁質(zhì)的酶基因在舞毒蛾幼蟲不同齡期相對(duì)表達(dá)量有所不同,其中幾丁質(zhì)酶與β-N-乙酰葡萄糖胺糖苷酶基因在幼蟲第六齡期與預(yù)蛹期相對(duì)表達(dá)量比較高,這兩類酶主要降解幼蟲時(shí)期的幾丁質(zhì)以便使舞毒蛾從幼蟲發(fā)育到蛹期。幾類幾丁質(zhì)脫乙酰基酶基因呈現(xiàn)不規(guī)律表達(dá),這可能是幾丁質(zhì)脫乙�；竻⑴c舞毒蛾各個(gè)時(shí)期幾丁質(zhì)降解的活動(dòng)。分析表明各類降解幾丁質(zhì)的酶基在舞毒蛾發(fā)育的過程中的相對(duì)表達(dá)量是一個(gè)動(dòng)態(tài)的過程,目的基因在每一個(gè)幼蟲不同時(shí)刻的表達(dá)都會(huì)有差別。LdNag2 dsRNA對(duì)舞毒蛾幼蟲蛻變?yōu)橛嫉倪^程有一定的致死效果,而其他基因?qū)ξ瓒径甑陌l(fā)育有延遲效果,各類基因在舞毒蛾發(fā)育過程中的功能并不相同。論文通過轉(zhuǎn)錄組測(cè)序在分子水平上研究幾丁質(zhì)降解的方式,為進(jìn)一步研究舞毒蛾奠定了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ),具有重要的學(xué)術(shù)價(jià)值。
【關(guān)鍵詞】：舞毒蛾 幾丁質(zhì) 實(shí)時(shí)熒光定量PCR RNA干擾
【學(xué)位授予單位】：太原理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S433.4
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-10
• 第一章 前言10-22
• 1.1 舞毒蛾概述10-11
• 1.1.1 舞毒蛾分布、習(xí)性與特征10
• 1.1.2 舞毒蛾的治理10-11
• 1.2 昆蟲幾丁質(zhì)與降解幾丁質(zhì)酶類11-14
• 1.2.1 昆蟲幾丁質(zhì)11
• 1.2.2 降解昆蟲幾丁質(zhì)酶的種類及應(yīng)用11-14
• 1.3 RNA-seq技術(shù)進(jìn)展14-18
• 1.3.1 RNA-seq技術(shù)簡(jiǎn)介14
• 1.3.2 RNA-seq技術(shù)分析方法14-18
• 1.3.3 RNA-seq技術(shù)分析內(nèi)容18
• 1.4 RNA干擾技術(shù)進(jìn)展18-19
• 1.4.1 RNA干擾技術(shù)簡(jiǎn)介18-19
• 1.4.2 RNA干擾技術(shù)在基因功能研究中的應(yīng)用19
• 1.5 本論文的研究目的與研究?jī)?nèi)容19-22
• 1.5.1 本論文的研究目的與意義19-20
• 1.5.2 本論文的研究?jī)?nèi)容20
• 1.5.3 本論文研究受資助情況20-22
• 第二章 測(cè)序數(shù)據(jù)處理與質(zhì)控22-34
• 2.1 試驗(yàn)樣品的選擇與數(shù)據(jù)分析軟件22-23
• 2.1.1 試驗(yàn)樣品的選擇22
• 2.1.2 總RNA的提取以及RNA樣品檢測(cè)22-23
• 2.1.3 數(shù)據(jù)分析軟件23
• 2.2 舞毒蛾轉(zhuǎn)錄組測(cè)序方法23
• 2.3 測(cè)序數(shù)據(jù)處理23-25
• 2.3.1 原始fq序列簡(jiǎn)介23-24
• 2.3.2 原始fq序列處理24-25
• 2.3.3 測(cè)序堿基質(zhì)量分析25
• 2.4 測(cè)序數(shù)據(jù)的組裝與基因表達(dá)注釋25-26
• 2.5 結(jié)果與討論26-33
• 2.5.1 舞毒蛾總RNA質(zhì)量檢測(cè)結(jié)果26-27
• 2.5.2 測(cè)序原始數(shù)據(jù)處理結(jié)果27-28
• 2.5.3 序列重組結(jié)果28-29
• 2.5.4 unigenes功能注釋29-32
• 2.5.5 親緣性分析32-33
• 2.6 本章小結(jié)33-34
• 第三章 降解幾丁質(zhì)的基因的篩選與克隆34-40
• 3.1 實(shí)驗(yàn)材料34
• 3.1.1 實(shí)驗(yàn)幼蟲34
• 3.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑及儀器34
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法34-38
• 3.2.1 降解幾丁質(zhì)的基因的篩選34-35
• 3.2.2 降解幾丁質(zhì)的相關(guān)基因的克隆35-38
• 3.3 結(jié)果分析38
• 3.3.1 降解幾丁質(zhì)的基因的篩選38
• 3.3.2 降解幾丁質(zhì)的基因的克隆38
• 3.4 本章討論38-40
• 第四章 幾類幾丁質(zhì)酶的表達(dá)分析40-48
• 4.1 實(shí)驗(yàn)材料40
• 4.1.1 實(shí)驗(yàn)幼蟲40
• 4.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑及儀器40
• 4.2 試驗(yàn)方法40-43
• 4.2.1 實(shí)驗(yàn)引物的合成與材料準(zhǔn)備40-41
• 4.2.2 幾類降解幾丁質(zhì)酶的基因的表達(dá)41-43
• 4.3 結(jié)果分析43-47
• 4.3.1 不同齡期舞毒蛾幾丁質(zhì)酶基因的表達(dá)分析43
• 4.3.2 不同齡期舞毒蛾幾丁質(zhì)脫乙�；富虻谋磉_(dá)分析43-44
• 4.3.3 不同齡期舞毒蛾β-N-乙酰葡萄糖胺糖苷酶基因的表達(dá)分析44-47
• 4.4 本章討論47-48
• 第五章 幾類幾丁質(zhì)酶的功能分析48-58
• 5.1 實(shí)驗(yàn)材料48
• 5.1.1 實(shí)驗(yàn)幼蟲48
• 5.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑及儀器48
• 5.2 試驗(yàn)方法48-51
• 5.2.1 體外合成dsRNA48-50
• 5.2.2 注射dsRNA50-51
• 5.2.3 觀察實(shí)驗(yàn)結(jié)果51
• 5.3 結(jié)果與分析51-56
• 5.3.1 舞毒蛾幾丁質(zhì)酶基因的功能分析51
• 5.3.2 舞毒蛾β-N-乙酰葡萄糖胺糖苷酶基因的功能分析51-54
• 5.3.3 舞毒蛾幾丁質(zhì)脫乙�；富虻墓δ芊治�54-56
• 5.4 本章討論56-58
• 第六章 全文總結(jié)58-60
• 參考文獻(xiàn)60-68
• 致謝68-70
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文與專利70

【參考文獻(xiàn)】

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