本文關(guān)鍵詞：N-甲基靛紅酸酐標(biāo)記杠柳新苷P分離粘蟲中腸結(jié)合蛋白的研究

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【摘要】：近年來西北農(nóng)林科技大學(xué)農(nóng)藥研究所對殺蟲植物杠柳(Periploca sepium Bunge)的活性成分及其殺蟲作用進(jìn)行了比較系統(tǒng)的研究。為了進(jìn)一步的研究杠柳殺蟲活性成分杠柳新苷P的殺蟲機(jī)理,本文對杠柳新苷P進(jìn)行修飾標(biāo)記后通過藥物與中腸蛋白離體孵育以及活體飼喂兩種不同處理方法,對杠柳新苷P作用于東方粘蟲幼蟲中腸組織上的結(jié)合蛋白進(jìn)行了初步研究。結(jié)果如下:(1)進(jìn)行了N-甲基靛紅酸酐對杠柳新苷P的標(biāo)記修飾,得到標(biāo)記產(chǎn)物杠柳新苷P-MIA,其對三齡粘蟲幼蟲的中毒癥狀與杠柳新苷P相同,載毒5μg的0.5cm×0.5cm小麥葉片飼喂后48 h死亡率為12.5%,低于相同劑量下杠柳新苷P的活性。(2)將P-MIA活體飼喂粘蟲六齡幼蟲提取的中腸粗蛋白和P-MIA與粘蟲六齡幼蟲中腸粗蛋白離體孵育后,在紫外波長350nm下檢測,用Q-Sepharose陰離子交換柱層析分別分離4個不同處理組(CK、杠柳新苷P處理組、標(biāo)記物P-MIA、鄰甲氨基苯甲酸甲酯)粗蛋白,對吸收值有差異餾分的蛋白進(jìn)行SDS-PAGE電泳,對相關(guān)蛋白條帶進(jìn)行蛋白質(zhì)譜分析。鑒定得到以下8種杠柳新苷P結(jié)合蛋白:類異翅盤蛋白、二磷酸核苷激酶、乙醇脫氫酶、甲基丙二酸半醛脫氫酶、雙特異性磷酸酶、果糖-1,6-二磷酸醛縮酶、Fe2+依賴的加氧酶超家族、過氧化氫酶。(3)將P-MIA活體飼喂粘蟲六齡幼蟲提取的中腸BBMV和P-MIA與粘蟲六齡幼蟲中腸BBMV離體孵育后,再用Q-Sepharose陰離子交換柱層析,對BBMV中疑似蛋白條帶進(jìn)行蛋白質(zhì)譜分析,鑒定得到了以下10種結(jié)合蛋白,分別為:類異翅盤蛋白、Fe2+依賴的加氧酶超家族、氨肽酶、過氧化氫酶、雙鏈RNA結(jié)合蛋白、NADH泛醌氧化還原酶、二硫鍵異構(gòu)酶、苯基貯存蛋白、跨膜蛋白、精氨酸激酶。
【關(guān)鍵詞】：東方粘蟲 中腸細(xì)胞 杠柳新苷P 結(jié)合蛋白
【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S433.4
【目錄】：

• 摘要6-7
• ABSTRACT7-11
• 第一章 文獻(xiàn)綜述11-23
• 1.1 杠柳化合物的相關(guān)研究概況11-18
• 1.1.1 杠柳所屬植物的相關(guān)研究11
• 1.1.2 杠柳化合物的主要成分11-16
• 1.1.3 杠柳新苷類化合物的毒理學(xué)研究16-18
• 1.2 蛋白質(zhì)標(biāo)記技術(shù)的研究概況18-22
• 1.2.1 蛋白質(zhì)標(biāo)記技術(shù)的種類以及應(yīng)用18-21
• 1.2.2 N -甲基靛紅酸酐的研究21-22
• 1.3 本課題的研究依據(jù)、思路22-23
• 第二章 杠柳新苷P標(biāo)記物的制備23-26
• 2.1 材料與方法23
• 2.1.1 材料23
• 2.1.2 標(biāo)記物的化學(xué)合成23
• 2.1.3 標(biāo)記物的活性測定23
• 2.2 結(jié)果與分析23-25
• 2.2.1 標(biāo)記產(chǎn)物的鑒定23-25
• 2.2.2 生測實(shí)驗(yàn)結(jié)果25
• 2.3 小結(jié)與討論25-26
• 第三章 杠柳新苷P結(jié)合蛋白的分離鑒定26-44
• 3.1 材料與方法26-32
• 3.1.1 材料26-28
• 3.1.2 活體飼喂法分離粗蛋白中杠柳新苷標(biāo)記物P-MIA的結(jié)合蛋白28-29
• 3.1.3 離體孵育分離粗蛋白中杠柳新苷標(biāo)記物P-MIA的結(jié)合蛋白29-30
• 3.1.4 離體孵育分離中腸BBMV中杠柳新苷標(biāo)記物P-MIA的結(jié)合蛋白30-31
• 3.1.5 活體飼喂法分離中腸BBMV中杠柳新苷P-MIA的結(jié)合蛋白31-32
• 3.2 結(jié)果與分析32-42
• 3.2.1 粗蛋白中結(jié)合蛋白的分離鑒定32-37
• 3.2.2 中腸BBMV中結(jié)合蛋白的分離鑒定37-42
• 3.3 小結(jié)與討論42-44
• 第四章 結(jié)論44-45
• 參考文獻(xiàn)45-50
• 附圖50-54
• 致謝54-55
• 作者簡介55

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

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中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

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本文編號：702314