本文關(guān)鍵詞：利用EMS誘變獲得甜橙抗?jié)儾⊥蛔凅w的研究

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【摘要】：柑橘潰瘍病是由柑橘黃單胞桿菌柑橘亞種Xanthomonas citri subsp. citri(又名為：地毯草黃單胞桿菌柑桔致病變種X.axonopodis pv. citri)引起的一種細(xì)菌性病害,也是一種世界性檢疫性病害,它嚴(yán)重危害國內(nèi)外的柑橘產(chǎn)業(yè)。柑橘是我國南方地區(qū)第一大水果,而大多柑橘商業(yè)品種都易感潰瘍病,因此尋找抗病資源、培育抗病的商用品種是解決此問題的根本途徑。因此,本文利用化學(xué)誘變劑甲基磺酸乙酯(Ethyl Methane Sulphonate, EMS)對甜橙實生苗上胚軸進(jìn)行離體誘變,通過用不同濃度潰瘍病菌粗提物進(jìn)行離體篩選,確定了適宜的抗?jié)儾∵x擇壓,并經(jīng)過離體接種、活體接種鑒定以期獲得較為穩(wěn)定的抗性材料,為研究柑橘抗?jié)儾【臋C(jī)理提供重要研究材料以及理論基礎(chǔ)。同時為了驗證柑橘潰瘍病菌肽聚糖是否能特異誘導(dǎo)柑橘體內(nèi)免疫反應(yīng)的病原相關(guān)分子模式,本文還分別將柑橘潰瘍病菌和其細(xì)胞壁成分之一肽聚糖接種感病品種冰糖橙和抗病突變體材料,分析接種前后各感、抗病材料中LYP2和CERK1基因的表達(dá)情況,以及分析了接種潰瘍病菌后引起感病基因CsLOBl在各抗病突變體材料中的表達(dá)情況,主要研究結(jié)果如下：1、以不同濃度梯度的EMS溶液對大紅甜橙上胚軸節(jié)間莖段進(jìn)行誘變處理,根據(jù)EMS對不定芽再生率產(chǎn)生半致死效應(yīng)的濃度和處理時間分別為：1.8%(v/v),處理2h。建立甜橙EMS誘變技術(shù)體系。2、驗證了潰瘍病菌粗提物對冰糖橙嫩梢具有危害作用,通過以不同濃度梯度潰瘍病菌粗提物對大紅甜橙上胚軸節(jié)間莖段進(jìn)行離體選擇培養(yǎng),得到其臨屆致死效應(yīng)的濃度為4%(v/v),建立甜橙抗性離體篩選體系。3、將半致死劑量的EMS誘變結(jié)合兩次不連續(xù)潰瘍病菌粗提物臨屆致死濃度的離體選擇,成功篩選到抗XccE的大紅甜橙突變體10株。經(jīng)離體接種驗證,突變體株系149,278,376表現(xiàn)出比較穩(wěn)定的抗病性。4、從柑橘潰瘍病菌中提取肽聚糖,并將其和潰瘍病菌分別活體接種冰糖橙和抗病突變體149、278和376。結(jié)果顯示,在兩種接種情況下,CERK1和LYP2在冰糖橙葉片中下調(diào)表達(dá)；CERK1在149、278和376中呈上調(diào)表達(dá)趨勢,376中表達(dá)差異最為顯著,而LYP2在376中呈上調(diào)表達(dá),在149和278中幾乎維持初始水平。因此,CERK1和LYP2可能是抗病突變體初始抗病過程中的關(guān)鍵基因,且在柑橘中可能存在由CERK1和LYP2作為組成成分構(gòu)成肽聚糖的識別系統(tǒng)。5、潰瘍病菌能誘導(dǎo)感病材料冰糖橙和抗病突變體149、278中CsLOBl基因表達(dá)水平上調(diào),但在冰糖橙中的表達(dá)量要遠(yuǎn)遠(yuǎn)高出在抗病突變體中的表達(dá)量；在376中其表達(dá)差異不顯著。因此認(rèn)為376株系抗病能力最強(qiáng),149和278株系為中等抗病。
【關(guān)鍵詞】：柑橘潰瘍病菌(Xanthomonas citri subsp.citri) 甲基磺酸乙酯(EMS) 肽聚糖(peptidoglycan PGN) LYP2基因 CERK1基因 CsLOB1基因
【學(xué)位授予單位】：湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S436.66
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-8
• 縮略詞表8-11
• 第一章 前言11-20
• 1.1 研究目的及意義11-13
• 1.2 國內(nèi)外研究進(jìn)展13-17
• 1.2.1 化學(xué)誘變劑在植物育種中的應(yīng)用13-15
• 1.2.2 EMS在誘變育種中的應(yīng)用15-17
• 1.3 植物與病原菌的互作模式研究進(jìn)展17-20
• 第二章 甜橙實生苗節(jié)間莖段EMS誘變體系的建立20-28
• 2.1 材料與方法20-21
• 2.1.1 試驗材料與試劑20-21
• 2.2 試驗方法21-22
• 2.2.1 材料準(zhǔn)備21
• 2.2.2 甜橙上胚軸節(jié)間莖段對EMS敏感度的檢測21
• 2.2.3 EMS誘變甜橙半致死劑量的確定21
• 2.2.4 不定芽的誘導(dǎo)生根及馴化移栽21-22
• 2.3 結(jié)果與分析22-26
• 2.3.1 甜橙上胚軸節(jié)間莖段對EMS敏感度的檢測22
• 2.3.2 EMS誘變甜橙半致死劑量的確定22-26
• 2.3.3 不定芽的誘導(dǎo)生根及馴化移栽26
• 2.4 討論26
• 2.5 小結(jié)26-28
• 第三章 甜橙抗?jié)儾⊥蛔凅w的篩選28-42
• 3.1 材料與方法29
• 3.1.1 試驗材料與試劑29
• 3.2 試驗方法29-32
• 3.2.1 材料準(zhǔn)備29-30
• 3.2.2 潰瘍病菌提取液的制備及其對感病材料生長的影響30
• 3.2.3 甜橙抗?jié)儾〈痔嵛锿蛔凅w的篩選30-32
• 3.3 結(jié)果與分析32-39
• 3.3.1 抗?jié)儾∵x擇壓的確定32-33
• 3.3.2 抗性突變體的篩選33-39
• 3.4 討論39-41
• 3.5 小結(jié)41-42
• 第四章 抗?jié)儾⊥蛔凅wLYP2、CERK1及CSLOB1基因的表達(dá)分析42-54
• 4.1 材料與方法44
• 4.1.1 供試材料與試劑44
• 4.2 試驗方法44-48
• 4.2.1 接種菌液的準(zhǔn)備44-45
• 4.2.2 PGN_((XCC))的提取45
• 4.2.3 活體接種PGN_((XCC))、潰瘍病菌及樣品的采集45-46
• 4.2.4 引物合成46
• 4.2.5 感病冰糖橙和甜橙抗病突變體總RNA的提取46-47
• 4.2.6 CDNA的合成47
• 4.2.7 LYP2、CERK1和CSLOB1基因表達(dá)分析47-48
• 4.3 結(jié)果與分析48-52
• 4.3.1 活體接種肽聚糖和潰瘍病菌后CERK1基因的相對量表達(dá)分析48-50
• 4.3.2 活體接種肽聚糖和潰瘍病菌后LYP2基因的相對量表達(dá)分析50
• 4.3.3 活體接種潰瘍病菌后CSLOB1基因的相對量表達(dá)分析50-52
• 4.4 討論52-53
• 4.5 小結(jié)53-54
• 全文主要結(jié)論54-55
• 創(chuàng)新點55
• 下一步工作計劃55-56
• 參考文獻(xiàn)56-67
• 致謝67-68
• 個人簡歷68

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