本文關(guān)鍵詞：文冠果脂肪酸合成兩個關(guān)鍵酶基因FAE1、FAD2的克隆與表達(dá)分析

  更多相關(guān)文章： 文冠果 多不飽和脂肪酸 超長鏈脂肪酸 FAE1 FAD2 RACE

【摘要】：文冠果(Xanthoceras sorbifoliaBunge),是我國特有的珍稀木本油料樹種,在我國三北地區(qū)廣泛種植。植物油是人類的三大營養(yǎng)物質(zhì)之一。現(xiàn)在越來越多的研究開始通過基因工程來調(diào)控植物油脂中脂肪酸的含量與組成。據(jù)研究報道,脂肪酸延長酶1(FAE1)與脂肪酸脫氫酶2(FAD2)分別是催化超長鏈脂肪酸與多不飽和脂肪酸合成的關(guān)鍵酶,而FAE1與FAD2基因是控制油料作物脂肪酸組成的關(guān)鍵基因。本研究以文冠果種子為材料,根據(jù)NCBI數(shù)據(jù)庫中的植物FAEl與FAD2基因序列設(shè)計引物,通過RT-PCR技術(shù)和RACE技術(shù),克隆獲得了文冠果FAEl與FAD2基因全長cDNA序列(分別命名為XsFAE1與XsFAD2-2)。結(jié)果表明,XsFAE1基因cDNA全長1914 bp,具有一個1491 bp的完整開放閱讀框,編碼497個氨基酸。XsFAD2-2基因cDNA全長1605 bp,具有一個1152 bp的完整開放閱讀框,編碼383個氨基酸。在此基礎(chǔ)上,還對兩個基因進(jìn)行了定量PCR分析其表達(dá)模式。分析結(jié)果表明,XsFAE1與XsFADD2-2基因均主要在種子中表達(dá),其中XsFAEl基因在開花后40天的種子中表達(dá)量最高,而XsFAD2-2基因在開花后80天的種子中表達(dá)量最高。本研究成功的獲得了XsF-AE1與XsFAD2-2基因全長cDNA序列,為下一步將XsFAE1與XsFAD2-2基因在油料作物種子中表達(dá)奠定基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：文冠果 多不飽和脂肪酸 超長鏈脂肪酸 FAE1 FAD2 RACE
【學(xué)位授予單位】：內(nèi)蒙古大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：Q943.2;S565.9
【目錄】：

• 摘要4-5
• abstract5-9
• 一 引言9-20
• 1.1 植物油脂的生物合成9-11
• 1.1.1 脂肪酸的合成9-10
• 1.1.2 三酰甘油的合成10
• 1.1.3 油體的合成10-11
• 1.2 芥酸合成關(guān)鍵酶基因FAE111-12
• 1.3 多不飽和脂肪酸合成關(guān)鍵酶基因FAD212-13
• 1.4 文冠果13
• 1.5 RACE介紹13-19
• 1.5.1 RACE原理13-15
• 1.5.2 新型RACE技術(shù)15-19
• 1.6 研究目的與意義19-20
• 二 材料與方法20-33
• 2.1 材料20-21
• 2.1.1 植物材料20
• 2.1.2 菌種與質(zhì)粒20
• 2.1.3 試劑20
• 2.1.4 引物20-21
• 2.2 方法21-33
• 2.2.1 文冠果幼苗的培育21-22
• 2.2.2 文冠果總DNA提取22
• 2.2.3 文冠果總RNA提取22-24
• 2.2.4 文冠果FAE1、FAD2基因中間片段的克隆24-26
• 2.2.5 RACE擴(kuò)增與克隆26-29
• 2.2.6 文冠果FAE1、FAD2基因cDNA與DNA全長序列的克隆29-31
• 2.2.7 文冠果FAE1、FAD2基因編碼蛋白的生物信息學(xué)分析31
• 2.2.8 文冠果FAE1、FAD2基因表達(dá)特性的分析31-33
• 三 結(jié)果與分析33-60
• 3.1 DNA提取33-34
• 3.2 RNA提取34-35
• 3.3 FAE1、FAD2基因的克隆35-46
• 3.3.1 基因中間片段擴(kuò)增與克隆35-36
• 3.3.2 3’RACE擴(kuò)增與克隆36-40
• 3.3.3 5’RACE擴(kuò)增與克隆40-42
• 3.3.4 基因cDNA及DNA全長的擴(kuò)增與克隆42-46
• 3.4 FAE1、FAD2基因編碼蛋白的生物信息學(xué)分析46-58
• 3.4.1 FAE1基因編碼蛋白的生物信息學(xué)分析46-51
• 3.4.2 FAD2基因編碼蛋白的生物信息學(xué)分析51-58
• 3.5 FAE1、FAD2基因表達(dá)特性的分析58-60
• 四 討論與結(jié)論60-64
• 4.1 討論60-63
• 4.1.1 文冠果種子總RNA的提取60
• 4.1.2 基因豐度60
• 4.1.3 3’RACE產(chǎn)物為多條的可能原因60-61
• 4.1.4 文冠果FAE1蛋白功能預(yù)測61
• 4.1.5 文冠果FAD2蛋白功能預(yù)測61-62
• 4.1.6 文冠果中FAD2基因家族的成員數(shù)62-63
• 4.2 結(jié)論63-64
• 參考文獻(xiàn)64-68
• 致謝68

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前6條

1 趙娜;張媛;李秋琦;李茹芳;郭惠紅;;文冠果FAD2的序列與功能分析[J];北京林業(yè)大學(xué)學(xué)報;2015年02期

2 牟洪香;侯新村;劉巧哲;;不同地區(qū)文冠果種仁油脂肪酸組分及含量的變化規(guī)律[J];林業(yè)科學(xué)研究;2007年02期

3 柴春山;蘆娟;蔡國軍;王子婷;;文冠果人工種群的果實發(fā)育與落花落果特性研究[J];植物研究;2012年01期

4 趙微;曾瑞霞;巴彩鳳;宋慧娟;蘇玉虹;;豬CFL2b基因cDNA克隆初步分析[J];中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報;2009年04期

5 肖玲,盧長明;油菜脂肪酸延長酶基因fae1片段的克隆與SNP分析[J];中國農(nóng)業(yè)科學(xué);2005年05期

6 趙芳;李桂華;劉振濤;靳曉鵬;;文冠果油理化特性及組成分析研究[J];河南工業(yè)大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);2011年06期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 李海霞;mRNA選擇性加尾在卵巢癌中的作用及其機(jī)理探索[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2014年

，

本文編號：696887