本文關(guān)鍵詞：Cry2Ab轉(zhuǎn)基因擬南芥的抗蟲作用及其對HearNPV增效作用的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：本研究以擬南芥(Arabidopsis thaliana)為植物載體,利用根癌農(nóng)桿菌(Agrobacterium tumefaciens)介導(dǎo)的花序侵染法對擬南芥轉(zhuǎn)化了Cry2Ab外源基因,并進(jìn)行了其對棉鈴蟲核型多角體病毒(Helicoverpa armigera nucleopolyhedrovirus,HearNPV)增效作用研究,取得如下結(jié)果:1、利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的花序侵染法(Floral dip)轉(zhuǎn)化擬南芥,通過Basta除草劑篩選,獲得了7株表現(xiàn)型為陽性的Cry2Ab轉(zhuǎn)基因擬南芥株系,通過PCR檢測,發(fā)現(xiàn)7個(gè)株系的基因組中均能夠檢測到目的條帶,從而初步確定為陽性的轉(zhuǎn)化擬南芥株系。2、通過RT-PCR檢測,表明Cry2Ab在其中的5個(gè)轉(zhuǎn)基因株系中有表達(dá),分別為株系A(chǔ)、B、C、E、G。其中,株系B的相對表達(dá)量最高,株系G的相對表達(dá)量最低,而野生型擬南芥中無表達(dá)。3、通過生物測定試驗(yàn)表明,株系B對棉鈴蟲的致死率為65.67%,株系C為50.33%,株系A(chǔ)為47.33%,株系E為46.67%,株系G為42.67%。取食Cry2Ab轉(zhuǎn)基因擬南芥會顯著降低蟲重,并使化蛹延遲。4、Cry2Ab轉(zhuǎn)基因擬南芥對Hear NPV的增效作用試驗(yàn)表明,飼喂株系B和Hear NPV的棉鈴蟲的LT50和LT90比對照組分別縮短了36.05%和39.95%。飼喂株系G和Hear NPV的棉鈴蟲的LT50和LT90比對照組分別縮短了17.96%和25.67%。結(jié)果表明,Cry2Ab轉(zhuǎn)基因擬南芥具有顯著的抗蟲活性,抑制棉鈴蟲的生長發(fā)育,并能顯著增強(qiáng)HearNPV的毒力。
【關(guān)鍵詞】：擬南芥 Cry2Ab 轉(zhuǎn)基因植物 Hear NPV 棉鈴蟲 增效
【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S432.21;S476.13
【目錄】：

• 摘要5-6
• Abstract6-9
• 第一章 文獻(xiàn)綜述9-13
• 1.1 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)基因技術(shù)簡介9-10
• 1.1.1. 根癌農(nóng)桿菌簡介9-10
• 1.1.2 轉(zhuǎn)基因植物篩選方法10
• 1.2 擬南芥轉(zhuǎn)基因簡介10-11
• 1.2.1 擬南芥（Arabidopsis thaliana）10
• 1.2.2 擬南芥轉(zhuǎn)基因方法10-11
• 1.3 Bt毒素蛋白簡介11
• 1.4 桿狀病毒簡介11
• 1.5 本研究的目的與意義11-13
• 第二章 實(shí)驗(yàn)材料與方法13-26
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料13-17
• 2.1.1 植物材料13
• 2.1.2 供試蟲體13
• 2.1.3 供試病毒13
• 2.1.4 儀器13-14
• 2.1.5 化學(xué)試劑14
• 2.1.6 工具酶和試劑盒14-15
• 2.1.7 菌株和質(zhì)粒15
• 2.1.8 載體15-16
• 2.1.9 培養(yǎng)基及主要試劑配制16-17
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法17-26
• 2.2.1 重組植物表達(dá)載體的構(gòu)建17-20
• 2.2.2 重組載體Cry2Ab-pSR784d轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌LBA440420-21
• 2.2.3 根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的擬南芥花序侵染法21-22
• 2.2.4 轉(zhuǎn)基因擬南芥的篩選22
• 2.2.5 T_3代轉(zhuǎn)基因植株的PCR檢測22-23
• 2.2.6 T_3代轉(zhuǎn)基因植株的定量RT-PCR（Quantitative RT-PCR）分析23-25
• 2.2.7 Cry2Ab轉(zhuǎn)基因擬南芥株系對棉鈴蟲致死率和日累積蟲重的測定25
• 2.2.8 Cry2Ab轉(zhuǎn)基因擬南芥對HearNPV增效作用的試驗(yàn)25-26
• 第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析26-33
• 3.1 Cry2Ab基因的克隆與重組植物表達(dá)載體的構(gòu)建26-27
• 3.2 轉(zhuǎn)基因植株的獲得27-28
• 3.3 T_3代轉(zhuǎn)基因植株的PCR檢測28
• 3.4 T_3代轉(zhuǎn)基因植株的實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR分析28-29
• 3.5 Cry2Ab轉(zhuǎn)基因擬南芥株系對棉鈴蟲累積死亡率的測定29
• 3.6 棉鈴蟲幼蟲日積累增重的測定29-30
• 3.7 Cry2Ab轉(zhuǎn)基因擬南芥對HearNPV的增效作用30-33
• 3.7.1 棉鈴蟲致死時(shí)間的測定30-31
• 3.7.2 棉鈴蟲日累積增重的測定31-33
• 第四章 結(jié)論與討論33-35
• 4.1 結(jié)論33
• 4.2 討論33-35
• 參考文獻(xiàn)35-38
• 致謝38-39
• 作者簡介39

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