發(fā)布時間：2024-03-14 03:12

　　近幾年來由于養(yǎng)殖方法不當(dāng)和水體環(huán)境破壞導(dǎo)致各種魚類病害頻繁發(fā)生,給魚類養(yǎng)殖業(yè)帶來了很大的經(jīng)濟損失。維氏氣單胞菌(Aeromonas veronii)可以引起草魚(Ctenopharyngodon idellus)敗血癥,短期內(nèi)造成大量死亡,課題組前期從患病草魚中篩選到了一株毒性較強的維氏氣單胞菌AvX005。草魚作為低等脊椎動物,當(dāng)病源微生物入侵時,非特異性免疫發(fā)揮重要作用,而溶菌酶是非特異性免疫中的關(guān)鍵部分。本論文主要研究了草魚g型溶菌酶和c型溶菌酶作為免疫刺激劑保護草魚免受AvX005感染的作用機制,對草魚健康養(yǎng)殖研究和應(yīng)用具有一定的價值。為研究草魚在感染AvX005后g型和c型溶菌酶的表達變化,采用qRT-PCR技術(shù)對感染AvX005的草魚進行Lys-g和Lys-c的表達水平分析,結(jié)果表明草魚感染AvX005后3 h肝臟和脾臟中基因lys-g和lys-c的轉(zhuǎn)錄均被顯著誘導(dǎo)。在肝臟和脾臟中,基因lys-g的轉(zhuǎn)錄水平在感染后24 h達到峰值,分別提高13倍和4.5倍;基因lys-c的轉(zhuǎn)錄水平在感染后12 h達到峰值,分別提高7.5倍和27倍。因此推測兩種溶菌酶蛋白在草魚早期抵御AvX...

【文章頁數(shù)】：87 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 緒論
    1.1 草魚病害
    1.2 病原菌維氏氣單胞菌
        1.2.1 維氏氣單胞菌簡介
        1.2.2 維氏氣單胞菌對漁業(yè)的危害
        1.2.3 維氏氣單胞菌疫苗的研究進展
        1.2.4 維氏氣單胞菌致病機制的研究進展
    1.3 魚類溶菌酶研究進展
        1.3.1 溶菌酶結(jié)構(gòu)
        1.3.2 溶菌酶功能
        1.3.3 魚類溶菌酶的分布
        1.3.4 溶菌酶在漁業(yè)生產(chǎn)中的應(yīng)用
    1.4 免疫佐劑QCDC
    1.5 立題依據(jù)和研究目的
第二章 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 菌株、質(zhì)粒和細(xì)胞
        2.1.2 實驗草魚
        2.1.3 培養(yǎng)基和抗生素
        2.1.4 主要試劑盒及試劑
        2.1.5 引物
        2.1.6 儀器設(shè)備
    2.2 實驗方法
        2.2.1 正常生理狀態(tài)下草魚g型和c型溶菌酶轉(zhuǎn)錄水平
        2.2.2 草魚感染AvX005后g型和c型溶菌酶轉(zhuǎn)錄水平變化
        2.2.3 草魚g型和c型溶菌酶原核表達載體的構(gòu)建及鑒定
        2.2.4 重組蛋白rLys-g和 rLys-c的分離純化
        2.2.5 重組蛋白rLys-g和 rLys-c抑菌活性
        2.2.6 草魚g型和c型溶菌酶真核表達載體的構(gòu)建及鑒定
        2.2.7 草魚溶菌酶對草魚肝臟細(xì)胞感染AvX005的保護效果
        2.2.8 重組質(zhì)粒對草魚抵抗AvX005感染的保護作用
        2.2.9 草魚注射lys-g和 lys-c后免疫反應(yīng)
第三章 結(jié)果與分析
    3.1 序列分析
    3.2 正常生理狀態(tài)下草魚g型和c型溶菌酶的轉(zhuǎn)錄水平
    3.3 草魚感染AvX005后g型和c型溶菌酶轉(zhuǎn)錄水平變化
    3.4 攜帶His標(biāo)簽的重組質(zhì)粒構(gòu)建及鑒定
        3.4.1 pET28a-lys-g重組質(zhì)粒的構(gòu)建與酶切鑒定
        3.4.2 pET28a-lys-c重組質(zhì)粒的構(gòu)建與酶切鑒定
        3.4.3 pSmartⅡ-lys-c重組質(zhì)粒的構(gòu)建與酶切鑒定
    3.5 重組蛋白rLys-g和 rLys-c對 AvX005 的裂解活性
        3.5.1 重組蛋白rLys-g和 rLys-c的誘導(dǎo)表達
        3.5.2 重組蛋白rLys-g和 rLys-c的純化與復(fù)性
        3.5.3 重組蛋白rLys-g和 rLys-c活性檢測
        3.5.4 重組蛋白rLys-g和 rLys-c抑菌活性檢測
    3.6 真核表達載體的構(gòu)建及鑒定
    3.7 重組質(zhì)粒保護L8824細(xì)胞免受AvX005感染的能力
        3.7.1 病原菌AvX005對細(xì)胞L8824的半致死濃度
        3.7.2 細(xì)胞L8824 中重組蛋白rLys-g和 rLys-c的表達
        3.7.3 重組溶菌酶蛋白對細(xì)胞L8824抗AvX005感染的保護效果
    3.8 草魚注射lys-g和 lys-c后免疫效果
        3.8.1 注射lys-g和 lys-c對草魚抗AvX005 感染的影響
        3.8.2 注射lys-g和 lys-c對草魚抗菌能力的影響
        3.8.3 注射lys-g和 lys-c后攻毒,草魚組織病理學(xué)變化
    3.9 草魚注射lys-g和 lys-c后免疫反應(yīng)
        3.9.1 注射lys-g和 lys-c后血清溶菌酶活力
        3.9.2 注射lys-g和 lys-c后非特異性免疫變化
        3.9.3 注射lys-g和 lys-c后相關(guān)免疫因子變化
第四章 討論
    4.1 病原菌AvX005對草魚的致病性
    4.2 草魚感染AvX005后溶菌酶的表達變化
    4.3 重組溶菌酶對致病菌的抑菌效果及對細(xì)胞的保護作用
    4.4 草魚注射lys-g和 lys-c后免疫效果
    4.5 草魚注射lys-g和 lys-c后免疫反應(yīng)
第五章 結(jié)論與展望
    5.1 結(jié)論
    5.2 展望
參考文獻
縮略詞表
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本文編號：3927972