辣椒(Capsicum annuum)是我國最主要的農(nóng)作物之一,具有重要的經(jīng)濟和食用價值,但在其生長過程中容易受到青枯菌侵染及高溫的脅迫,這對辣椒的品質(zhì)和產(chǎn)量造成了嚴重的影響。因此,研究辣椒的抗病抗逆機制,是提高辣椒品質(zhì)和產(chǎn)量的關(guān)鍵因素之一。本研究克隆了一個辣椒WRKY家族成員CaWRKY20,并對其結(jié)構(gòu)和功能進行了初步分析。主要結(jié)果如下:(1)從辣椒葉片中克隆得到一個全長為1821 bp的cDNA,含有兩個保守的WRKY結(jié)構(gòu)域,與馬鈴薯、煙草、番茄、葡萄和擬南芥等氨基酸序列有著較高的同源性,分別為73.08%,69.22%,58.35%,54.85%和49.58%,并將其命名為CaWRKY20,它屬于WRKY家族成員中的第Ⅰ類。(2)利用構(gòu)建好的35S::CaWRKY20-GFP融合表達載體,在煙草葉片中瞬時過表達,發(fā)現(xiàn)CaWRKY20基因編碼的蛋白定位于細胞核內(nèi),說明該基因作為轉(zhuǎn)錄因子在細胞核內(nèi)發(fā)揮作用。利用qRT-RCR檢測了常溫接青枯菌、高溫以及噴施外源激素MeJA、ETH和SA后CaWRKY20的表達模式,結(jié)果發(fā)現(xiàn)該基因在常溫接青枯菌和高溫條件下中呈上調(diào)表達,同時還受外源激素...

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖3-1辣椒CaWRKY20的氨基酸序列與其他物種的同源性比對Figure3-1AlignmentoftheaminoacidsequenceofCaWRKY20inpepperwithotherspecies藍色陰影部分：50%-75%，紅色陰影部分：75%-100%，黑色陰影部分：100%；黑色線

圖3-2辣椒CaWRKY20基因的克隆Figure3-2CloningofCaWRKY20gene

-20-3.3CaWRKY20基因的克隆通過提取辣椒葉片RNA，并反轉(zhuǎn)錄成cDNA，用特異引物擴增，成功獲得該基因的全長PCR產(chǎn)物，大小為1821bp（圖3-2）。圖3-2辣椒CaWRKY20基因的克隆Figure3-2CloningofCaWRKY20geneM：DL2000D....

圖3-3CaWRKY20啟動子順式作用元件分析

-21-高溫脅迫的誘導(dǎo)表達。植物激素，如MeJA、ET和SA等，是重要的信號分子，在調(diào)控下游防御基因的表達和對生物和非生物脅迫的生理反應(yīng)中起著至關(guān)重要的作用。為了檢測CaWRKY20是否在這些激素中參與信號通路，我們用qRT-PCR檢測了不同外源激素（MeJA、ETH和SA）處理....

圖3-4在青枯菌、高溫以及噴施MeJA、ETH和SA處理下CaWRKY20的轉(zhuǎn)錄水平（A）在青枯菌處理下，CaWRKY20在辣椒葉片中的相對表達量；（B）在高溫處理下，CaWRKY20在辣椒葉片中的相對表達量；（C-E）分別表示CaWRKY20在辣椒葉片上噴施外

-22-圖3-4在青枯菌、高溫以及噴施MeJA、ETH和SA處理下CaWRKY20的轉(zhuǎn)錄水平（A）在青枯菌處理下，CaWRKY20在辣椒葉片中的相對表達量；（B）在高溫處理下，CaWRKY20在辣椒葉片中的相對表達量；（C-E）分別表示CaWRKY20在辣椒葉片上噴施外源100μ....

本文編號：3893022