苜蓿銀紋夜蛾核型多角體病毒(Autographa californica multiple nuclear polyhedrosis virus,AcMNPV)是首個完成全基因組測序的病毒,被認(rèn)為是桿狀病毒的模式種。近年來,AcMNPV被廣泛用做生物殺蟲劑,并被稱為安全殺蟲劑,但因其殺蟲效率較低等局限性從而限制了其作為殺蟲劑的廣泛使用。近一年來世界十大害蟲之一草地貪夜蛾侵入我國,并且預(yù)計2020年全面爆發(fā),最先可能遭到迫害的是小麥,其次是玉米等作物。面對如此巨大的糧食安全挑戰(zhàn),需要聯(lián)合各種防治手段和抗性治理方法,以減少殺蟲劑的過度使用,所以尋找一種安全高效的生物殺蟲劑刻不容緩。因此,為了提高AcMNPV的抗蟲活性,全面了解其基因組中各基因的功能顯得尤為重要。AcMNPV基因組中的最后一個開放閱讀框AcOrf-154即ac154,基因全長246bp,至今仍無文獻(xiàn)報道其在病毒感染過程中發(fā)揮的作用。有文獻(xiàn)報道在家蠶核型多角體病毒(Bombyx mori nucleopolyhedrovirus,BmNPV)中存在ac154的同源基因bm129,敲除此基因獲得的重組病毒感染能力增大,但是對其在...

【文章頁數(shù)】：88 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 桿狀病毒
        1.1.1 桿狀病毒概述
        1.1.2 桿狀病毒的分類
        1.1.3 桿狀病毒的結(jié)構(gòu)
        1.1.4 桿狀病毒的生活周期
        1.1.5 桿狀病毒基因表達(dá)
        1.1.6 λ-Red同源重組及其應(yīng)用
    1.2 桿狀病毒Ac MNPV的 ac154 基因
        1.2.1 ac154 概述
        1.2.2 Ac154 生物信息學(xué)分析
        1.2.3 Ac154 的相關(guān)研究進(jìn)展
    1.3 細(xì)胞凋亡和桿狀病毒感染
        1.3.1 桿狀病毒p35 基因
        1.3.2 草地貪夜蛾Sfp53 基因
    1.4 昆蟲桿狀病毒表達(dá)載體系統(tǒng)的研究概況
    1.5 論文的設(shè)計思路
        1.5.1 研究內(nèi)容與意義
        1.5.2 研究方法
        1.5.3 實驗流程
        1.5.4 研究的創(chuàng)新點
第二章 重組桿狀病毒vAc^ac154KO-EGFP、vAc^ac154KO-Ac154-EGFP和 vAc-Ac154-EGFP的構(gòu)建及Ac154-EGFP的表達(dá)分析
    2.1 引言
    2.2 實驗材料
        2.2.1 主要實驗儀器
        2.2.2 主要試劑及其配置
        2.2.3 細(xì)胞、病毒、菌株及載體
    2.3 實驗方法
        2.3.1 重組病毒vAc^ac154KO-EGFP、vAc^ac154KO-Ac154-EGFP和 vAc-Ac154-EGFP的構(gòu)建
        2.3.2 Sf9 細(xì)胞的培養(yǎng)
        2.3.3 噬斑法測定病毒的滴度
        2.3.4 熒光定位分析Ac154-EGFP在宿主細(xì)胞中的分布
        2.3.5 Western blot及熒光顯微鏡觀察分析Ac154-EGFP的表達(dá)量
    2.4 實驗結(jié)果
        2.4.1 重組桿粒Bacmid^ac154KO-EGFP的構(gòu)建
        2.4.2 重組桿粒Bacmid^ac154KO-Ac154-EGFP的構(gòu)建
        2.4.3 重組桿粒Bacmid-Ac154-EGFP的構(gòu)建
        2.4.4 重組病毒vAc^ac154KO-EGFP、vAc^ac154KO-Ac154-EGFP和 vAc-Ac154-EGFP的獲得
        2.4.5 熒光顯微鏡和Western blot檢測Ac154-EGFP在 Sf9 細(xì)胞中的表達(dá)水平.
        2.4.6 熒光定位和Western blot檢測Ac154-EGFP在 Sf9 細(xì)胞核內(nèi)的積累
    2.5 討論
第三章 Ac154在Ac MNPV侵染宿主細(xì)胞過程中的功能分析
    3.1 引言
    3.2 實驗材料
        3.2.1 主要實驗儀器
        3.2.2 主要試劑及其配制
        3.2.3 細(xì)胞、病毒
    3.3 實驗方法
        3.3.1 Sf9 細(xì)胞的培養(yǎng)
        3.3.2 病毒生長曲線分析
        3.3.3 Real-time PCR檢測重組病毒對抗凋亡基因p35 轉(zhuǎn)錄水平的影響
        3.3.4 MTT實驗分析重組病毒對Sf9 細(xì)胞增殖的影響
        3.3.5 Western blot分析重組病毒感染Sf9 細(xì)胞中SfP53 的表達(dá)
    3.4 實驗結(jié)果
        3.4.1 重組病毒子代病毒增殖的影響分析
        3.4.2 重組病毒對Sf9 細(xì)胞增殖的影響分析
        3.4.3 重組病毒侵染過程中抗凋亡基因p35 轉(zhuǎn)錄水平的分析
        3.4.4 重組病毒感染的Sf9 細(xì)胞中SfP53 的表達(dá)量分析
    3.5 討論
第四章 AcMNPV p35 基因缺失對Ac154 發(fā)揮作用的分析
    4.1 引言
    4.2 實驗材料
        4.2.1 主要實驗儀器
        4.2.2 主要試劑及其配置
        4.2.3 細(xì)胞、病毒、菌株及載體
    4.3 實驗方法
        4.3.1 重組病毒vAc^p35KO-EGFP和 vAc^p35KO-Ac154-EGFP的構(gòu)建
        4.3.2 Sf9 細(xì)胞的培養(yǎng)
        4.3.3 噬斑法測定病毒的滴度
        4.3.4 病毒生長曲線分析
        4.3.5 MTT實驗分析重組病毒對Sf9 細(xì)胞增殖的影響
        4.3.6 Western blot分析重組病毒感染Sf9 細(xì)胞中SfP53 的表達(dá)
    4.4 實驗結(jié)果
        4.4.1 重組桿粒Bacmid^p35KO-EGFP的構(gòu)建
        4.4.2 重組桿粒Bacmid^p35KO-Ac154-EGFP的構(gòu)建
        4.4.3 重組病毒vAc^p35KO-EGFP和 vAc^p35KO-Ac154-EGFP的獲得
        4.4.4 重組病毒子代病毒增殖的分析
        4.4.5 重組病毒對Sf9 細(xì)胞增殖的影響分析
        4.4.6 重組病毒感染的Sf9 細(xì)胞中SfP53 的表達(dá)量分析
    4.5 討論
總結(jié)與展望
參考文獻(xiàn)
附錄
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
致謝
個人簡況及聯(lián)系方式



本文編號：3845454