本研究開展了建立基于脂多糖的間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(LPS-ELISA)和基于鴨疫里默氏菌(RA)超聲裂解物的間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(PRO-ELISA)檢測(cè)血清1型鴨疫里默氏菌(RA-1)抗體、鴨傳染性漿膜炎滅活疫苗免疫產(chǎn)蛋種鴨后其種蛋卵黃及6日齡雛鴨血清中LPS-ELISA抗體/PRO-ELISA抗體/試管凝集試驗(yàn)抗體的消長(zhǎng)規(guī)律、雛鴨母源抗體水平與抵抗RA-1強(qiáng)毒攻擊的關(guān)系評(píng)估等,獲得如下結(jié)果：1、檢測(cè)RA-1抗體的LPS-ELISA和PRO-ELISA方法建立LPS-ELISA:LPS最佳包被濃度為12.50 ng/μL,血清最佳稀釋濃度為1：800,酶標(biāo)二抗最佳稀釋度為1：400。PRO-ELISA:RA超聲裂解抗原最佳包被濃度為1.56 ng/μL,血清最佳稀釋濃度為]：400,酶標(biāo)二抗最佳稀釋度為1：800。以上兩種方法與經(jīng)典的RA試管凝集試驗(yàn)具有較好的平行關(guān)系。2、鴨傳染性漿膜炎滅活疫苗免疫種鴨后抗體傳至卵黃及下一代6日齡雛鴨的消長(zhǎng)規(guī)律60只4月齡產(chǎn)蛋種鴨注射0.5mL鴨傳染性漿膜炎滅活疫苗,于第3、6、9、12、15、18、21、24、27、30、33、36天收集當(dāng)天所產(chǎn)的...

【文章頁數(shù)】：55 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

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中文摘要
Abstract
縮略詞表
一 文獻(xiàn)綜述
    1 前言
        1.1 鴨傳染性漿膜炎概述
        1.2 病原學(xué)
        1.3 流行病學(xué)
        1.4 臨診癥狀和病理變化
        1.5 診斷
    2 鴨傳染性漿膜炎防治研究進(jìn)展
        2.1 鴨傳染性漿膜炎的預(yù)防
        2.2 鴨傳染性漿膜炎的藥物防治
        2.3 鴨傳染性漿膜炎的疫苗預(yù)防
    3 鴨傳染性漿膜炎檢測(cè)方法的研究進(jìn)展
        3.1 免疫熒光檢測(cè)技術(shù)
        3.2 PCR檢測(cè)方法
        3.3 鴨傳染性漿膜炎抗體的檢測(cè)方法
    4 本試驗(yàn)研究的目的意義
二 試驗(yàn)內(nèi)容
    1 試驗(yàn)材料
        1.1 試驗(yàn)動(dòng)物、菌株和試劑
        1.2 主要儀器
    2 試驗(yàn)方法
        2.1 LPS-ELISA方法的建立和PRO-ELISA方法優(yōu)化
            2.1.1 RA-1陽性血清制備
            2.1.2 LPS-ELISA方法的建立
            2.1.3 PRO-ELISA方法條件的優(yōu)化
        2.2 免疫種鴨后不同時(shí)間點(diǎn)卵黃抗體及后代錐鴨血清抗體的消長(zhǎng)規(guī)律
            2.2.1 免疫種鴨收集鴨蛋提取卵黃抗體和孵育雛鴨提取血清
            2.2.2 試管凝集試驗(yàn)檢測(cè)卵黃抗體和雛鴨血清抗體
            2.2.3 兩種間接ELISA方法檢測(cè)卵黃抗體和雛鴨血清抗體效價(jià)
        2.3 后代雛鴨母源抗體效價(jià)測(cè)定及攻毒保護(hù)試驗(yàn)
            2.3.1 免疫種鴨、收集鴨蛋和孵育雛鴨
            2.3.2 不同日齡雛鴨血清制備
            2.3.3 檢測(cè)不同日齡雛鴨血清抗體效價(jià)
            2.3.4 雛鴨攻毒保護(hù)試驗(yàn)
    3 結(jié)果
        3.1 血清1型鴨疫里默氏菌(RA-1)陽性血清制備
            3.1.1 不完全弗氏佐劑乳化抗原物理性質(zhì)與無菌檢驗(yàn)結(jié)果
            3.1.2 收集的RA-1陽性血清
        3.2 建立LPS-ELISA條件優(yōu)化結(jié)果
            3.2.1 測(cè)定抗原和血清工作濃度
            3.2.2 酶標(biāo)抗體的工作濃度
            3.2.3 最佳封閉液的選擇
            3.2.4 包被最佳工作條件
            3.2.5 酶標(biāo)抗體的最佳孵育時(shí)間
            3.2.6 一抗的最佳孵育時(shí)間
            3.2.7 最佳封閉時(shí)間
            3.2.8 底物顯色時(shí)間的測(cè)定
            3.2.9 陰性臨界值的測(cè)定
            3.2.10 特異性檢測(cè)
            3.2.11 變異系數(shù)測(cè)定
        3.3 PRO-ELISA條件的優(yōu)化
            3.3.1 測(cè)定抗原和血清工作濃度
            3.3.2 酶標(biāo)抗體的工作濃度
            3.3.3 陰性臨界值的測(cè)定
        3.4 試管凝集試驗(yàn)檢測(cè)種蛋卵黃和雛鴨血清抗體效價(jià)
        3.5 間接ELISA檢測(cè)卵黃抗體效價(jià)和雛鴨體內(nèi)血清抗體效價(jià)
            3.5.1 PRO-ELISA檢測(cè)卵黃抗體效價(jià)和雛鴨體內(nèi)血清抗體效價(jià)
            3.5.2 LPS-ELISA檢測(cè)種蛋卵黃抗體效價(jià)和雛鴨體內(nèi)血清抗體效價(jià)
        3.6 雛鴨出殼后母源抗體消長(zhǎng)規(guī)律
            3.6.1 后代雛鴨血清凝集抗體消長(zhǎng)規(guī)律
            3.6.2 PRO-ELISA檢測(cè)雛鴨出殼后體內(nèi)母源抗體效價(jià)
            3.6.3 LPS-ELISA檢測(cè)雛鴨出殼后體內(nèi)血清抗體效價(jià)
        3.7 雛鴨攻毒保護(hù)試驗(yàn)
    4 討論
三 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號(hào)：3821592