鳳丹白(Paeonia.ostii)牡丹不僅具有很好的觀賞與藥用價(jià)值,還有較高的油用價(jià)值。因牡丹繁殖周期長、系數(shù)低,牡丹新品種培育受到傳統(tǒng)育種方式的限制。再生體系的研究為牡丹的高效育種提供可行方法,遺傳轉(zhuǎn)化的研究為牡丹性狀改良奠定了基礎(chǔ)。目前牡丹遺傳轉(zhuǎn)化仍存在再生體系不穩(wěn)定,轉(zhuǎn)化效率低等問題。本實(shí)驗(yàn)以牡丹成熟種胚和無菌子葉為實(shí)驗(yàn)材料,進(jìn)行愈傷組織的誘導(dǎo)、成熟以及分化研究,以轉(zhuǎn)化載體含甜菜紅素生物合成基因,對(duì)牡丹進(jìn)行農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化和轉(zhuǎn)化條件篩選,構(gòu)建糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)的成胚雙元載體,并對(duì)牡丹子葉進(jìn)行農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化。本實(shí)驗(yàn)的主要研究結(jié)果如下:1.本實(shí)驗(yàn)中,種胚萌發(fā)率為92%,加入腐胺可促使胚苗強(qiáng)壯,也有利于生根。500mg/LGA3浸泡種子48h后,剝?nèi)》N胚到萌發(fā)培養(yǎng)基:改良MS+6-BA0.5mg/L+GA30.5mg/L+Put1.0mg/L,可有效破除休眠。胚苗生長培養(yǎng)基:改良MS+6-BA0.5mg/L+GA30.2mg/L+Put 1.0mg/L。2.誘導(dǎo)愈傷組織試驗(yàn)材料為種胚和子葉,種胚誘導(dǎo)愈傷組織培養(yǎng)基為:改良MS(蔗糖100g/L)+6-BA0.5mg/L+PIC2.0mg/L,愈傷組...

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞表
第1章 緒論
    1.1 引言
    1.2 國內(nèi)外研究現(xiàn)狀
        1.2.1 外植體的選擇
        1.2.2 培養(yǎng)基選擇
    1.3 牡丹再生途徑
        1.3.1 愈傷組織的誘導(dǎo)
        1.3.2 器官發(fā)生途徑
        1.3.3 體細(xì)胞胚發(fā)生
        1.3.4 胚胎發(fā)生分子機(jī)制
    1.4 遺傳轉(zhuǎn)化技術(shù)與誘導(dǎo)表達(dá)載體
        1.4.1 遺傳轉(zhuǎn)化技術(shù)
        1.4.2 誘導(dǎo)型表達(dá)系統(tǒng)
        1.4.3 地塞米松誘導(dǎo)系統(tǒng)原理
        1.4.4 地塞米松系統(tǒng)的應(yīng)用
    1.5 本研究的目的與意義
    1.6 技術(shù)路線
第2章 鳳丹白再生體系的研究
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 主要實(shí)驗(yàn)儀器及試劑
        2.1.3 培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 材料消毒
        2.2.2 種胚萌發(fā)
        2.2.3 誘導(dǎo)愈傷組織
        2.2.4 愈傷組織分化實(shí)驗(yàn)
        2.2.5 不定芽培養(yǎng)
        2.2.6 生根誘導(dǎo)
        2.2.7 移栽
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 種胚萌發(fā)
        2.3.3 不同外植體誘導(dǎo)愈傷組織
        2.3.4 愈傷分化
    2.4 討論
    2.5 小結(jié)
        2.5.1 鳳丹白種胚離體培養(yǎng)
        2.5.2 鳳丹白胚性愈傷組織的誘導(dǎo)
        2.5.3 胚性愈傷組織的分化
第3章 鳳丹白遺傳轉(zhuǎn)化的研究
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 菌株
        3.1.2 植物材料
        3.1.3 培養(yǎng)基及溶液準(zhǔn)備
    3.2 愈傷組織轉(zhuǎn)化
        3.2.1 子葉和愈傷組織預(yù)培養(yǎng)
        3.2.2 篩選劑與抑菌劑
        3.2.3 農(nóng)桿菌的活化培養(yǎng)
        3.2.4 侵染方式的篩選
        3.2.5 農(nóng)桿菌侵染愈傷組織
        3.2.6 共培養(yǎng)后處理
        3.2.7 篩選培養(yǎng)
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 子葉和胚性愈傷組織的預(yù)培養(yǎng)
        3.3.2 篩選劑的選擇與濃度確定
        3.3.3 農(nóng)桿菌浸染濃度與浸染時(shí)間的確定
        3.3.4 共培養(yǎng)后延遲培養(yǎng)
        3.3.5 轉(zhuǎn)化篩選
    3.4 討論
    3.5 小結(jié)
第4章 雙元載體構(gòu)建與遺傳轉(zhuǎn)化
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.1 植物材料
        4.1.2 農(nóng)桿菌菌株及質(zhì)粒
    4.2 雙元載體pYB9664 的構(gòu)建
        4.2.1 BoBBMS和 GRLBDS基因合成
        4.2.2 BoBBMS和 GRLBDS基因片段回收
        4.2.3 雙元載體的構(gòu)建
        4.2.4 高效根癌農(nóng)桿菌的電擊轉(zhuǎn)化
    4.3 鳳丹白牡丹pYB9664 轉(zhuǎn)化
        4.3.1 鳳丹白愈傷組織預(yù)培養(yǎng)
        4.3.2 pYB9664 農(nóng)桿菌活化培養(yǎng)
        4.3.3 農(nóng)桿菌侵染
        4.3.4 侵染后處理
        4.3.5 篩選培養(yǎng)
        4.3.6 分化誘導(dǎo)
    4.4 結(jié)果與分析
        4.4.1 pYB9664 雙元載體的構(gòu)建
        4.4.2 轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌的篩選
        4.4.3 子葉轉(zhuǎn)化
    4.5 討論
    4.6 小結(jié)
第5章 結(jié)論與展望
    5.1 鳳丹白種子的離體培養(yǎng)
    5.2 鳳丹白胚性愈傷組織的誘導(dǎo)與分化
    5.3 遺傳轉(zhuǎn)化體系的硏究
    5.4 目的基因性狀表達(dá)
    5.5 雙元載體pYB9664 的構(gòu)建與轉(zhuǎn)化
    5.6 存在的不足與展望
參考文獻(xiàn)
附錄
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
致謝



本文編號(hào)：3820792