甜瓜(Cucumis melo L.)是我國廣泛種植的重要經(jīng)濟作物,其香甜的品質(zhì)深受消費者認可及歡迎。然而,品種、栽培技術(shù)及環(huán)境等不利因素使設(shè)施栽培中成熟時期的甜瓜常出現(xiàn)苦味,對果實品質(zhì)及商品性造成了不利影響。苦味是甜瓜果實容易出現(xiàn)的性狀之一,主要由四環(huán)三萜化合物葫蘆素B引起。CPPU是生產(chǎn)中常用的細胞分裂素類植物生長調(diào)節(jié)劑,因其能有效提高甜瓜坐果率而被廣泛應(yīng)用。生產(chǎn)中發(fā)現(xiàn),濃度較高的CPPU會引起果實苦味,但關(guān)于CPPU對甜瓜果實苦味物質(zhì)葫蘆素B合成的影響知之甚少。因此,篩選出甜瓜生產(chǎn)中合理的CPPU濃度范圍,進一步明確CPPU對甜瓜苦味物質(zhì)葫蘆素B合成的調(diào)控機制,對提高設(shè)施甜瓜果實品質(zhì)有重要意義。本試驗以生產(chǎn)中常出現(xiàn)苦味的薄皮甜瓜品種‘YMR’和極少出現(xiàn)苦味的品種‘HDB’為試材,分析了葫蘆素B在各組織中的積累以及葫蘆素B相關(guān)基因的時空表達;設(shè)置了不同濃度CPPU在植株開花當天噴花,研究其對薄皮甜瓜果實葫蘆素B積累的影響;同時構(gòu)建了果實特異性轉(zhuǎn)錄因子CmBt過表達載體,使其在20 mg·L-1CPPU誘導(dǎo)7 d后的果實中瞬時表達,探究CmBt是否響應(yīng)20 mg·L-1CPPU進而促...

【文章頁數(shù)】：55 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 前言
    1.1 葫蘆科蔬菜的苦味遺傳特性及苦味檢測方法
        1.1.1 葫蘆科蔬菜的苦味遺傳特性
        1.1.2 苦味檢測方法
    1.2 葫蘆素的研究進展
        1.2.1 葫蘆素的種類及分布
        1.2.2 葫蘆素的合成、修飾及糖基化
        1.2.3 葫蘆素合成通路解析及差異進化
    1.3 葫蘆素的轉(zhuǎn)錄調(diào)控及轉(zhuǎn)運機制
        1.3.1 葫蘆素轉(zhuǎn)錄調(diào)控
        1.3.2 葫蘆素的轉(zhuǎn)運
    1.4 環(huán)境條件及栽培技術(shù)對葫蘆素的調(diào)控
    1.5 CPPU生理功能及對園藝作物品質(zhì)的影響
        1.5.1 CPPU主要的生理功能
        1.5.2 CPPU對園藝作物品質(zhì)的影響
    1.6 目的與意義
2 材料與方法
    2.1 試驗材料及處理
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 試驗處理
        2.1.3 載體、酶及試劑
        2.1.4 試劑準備
    2.2 試驗方法
        2.2.1 果實單果重及內(nèi)含物的測定
            2.2.1.1 果實單果重的測定
            2.2.1.2 果實成熟期可溶性固形物的測定
            2.2.1.3 果實成熟期可溶性糖的測定
        2.2.2 果實苦味感官評價及葫蘆素B的測定
            2.2.2.1 果實苦味感官評價分析
            2.2.2.2 葫蘆素B含量的測定
        2.2.3 CmBt基因的克隆
        2.2.4 CmBt過表達載體的構(gòu)建
        2.2.5 CmBt在甜瓜果實中瞬時表達及LUC信號檢測
            2.2.5.1 CmBt在甜瓜果實中瞬時表達
            2.2.5.2 植物LUC信號檢測
        2.2.6 qRT-PCR測定基因表達量及數(shù)據(jù)處理
            2.2.6.1 qRT-PCR測定基因表達量
            2.2.6.2 數(shù)據(jù)處理
3 結(jié)果與分析
    3.1 薄皮甜瓜各組織葫蘆素B的分布及其相關(guān)基因時空表達模式分析
        3.1.1 薄皮甜瓜各組織葫蘆素B的分布
        3.1.2 葫蘆素B合成及調(diào)控基因的時空表達模式分析
    3.2 不同濃度CPPU對單果重、可溶性固形物及可溶性糖的影響
    3.3 CPPU對果實葫蘆素B積累及其相關(guān)基因的影響
        3.3.1 不同濃度CPPU對果實發(fā)育時期葫蘆素B積累的影響
        3.3.2 不同濃度CPPU對果實葫蘆素B相關(guān)基因表達的影響
        3.3.3 不同發(fā)育時期果實各部位葫蘆素B的積累及果實苦味感官評價
        3.3.4 CPPU對果實孵育圓片中葫蘆素B積累的影響
    3.4 CmBt表達載體的構(gòu)建及其在果實中的瞬時表達
        3.4.1 CmBt基因的全長克隆及其表達載體的構(gòu)建
        3.4.2 農(nóng)桿菌侵染后的甜瓜表型變化
        3.4.3 農(nóng)桿菌侵染后CmBt的變化
        3.4.4 農(nóng)桿菌侵染后甜瓜果實葫蘆素B含量的變化
        3.4.5 農(nóng)桿菌侵染后甜瓜果實葫蘆素B合成基因的表達
4 討論
    4.1 葫蘆素B在薄皮甜瓜組織中的分布及其基因的表達模式
    4.2 CPPU對甜瓜果實葫蘆素B積累的影響
    4.3 CmBt響應(yīng)20 mg·L^-1CPPU誘導(dǎo)甜瓜果實葫蘆素B積累
5 結(jié)論
    5.1 薄皮甜瓜葫蘆素B主要積累于根和花后7 d的果實中，且葫蘆素B相關(guān)基因表達與各組織中葫蘆素B含量趨勢一致。
    5.2 20mg·L^-1CPPU促進薄皮甜瓜果實葫蘆素8積累且誘導(dǎo)CmBi、Cm710、CmACT及果實特異性轉(zhuǎn)錄因子CmBt顯著上調(diào)表達。
    5.3 薄皮甜瓜果實在發(fā)育前期葫蘆素B含量瓜瓢中最髙，在發(fā)育后期及成熟時期主要在蒂果肉或瓜皮部位積累，且20 mg·L^-1CPPU顯著增加果實各部位葫蘆素B含量及成熟果實苦味發(fā)生的概率。
    5.4 果實圓片孵育實驗進一步表明20 mg·L^-1CPPU顯著促進果實葫蘆素B積累。
    5.5 20 mg·L^-1CPPU誘導(dǎo)了果實特異性轉(zhuǎn)錄因子CmBt表達進而促進了果實葫蘆素B的合成與積累。
參考文獻
附錄
致謝
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