天女木蘭(Magnolia sieboldii K.Koch,Ms)是集觀賞、藥用價(jià)值于一身的木蘭科落葉小喬木,種子具有深休眠特性,繁育困難。ABA(abscisic acid,ABA)受體PYR/PYL/RCARs基因家族作為ABA信號(hào)傳導(dǎo)通路的起始組分發(fā)揮著重要的作用,對(duì)于揭開種子休眠解除的作用機(jī)制具有重要意義。本研究基于天女木蘭種子轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù),篩選出天女木蘭中5個(gè)AtPYRL同源基因(MsPYR/PYLs/RCAR,MsPYLs)中最具有代表性的MsPYR1基因,并以天女木蘭PYR1為研究對(duì)象,利用基因克隆、實(shí)時(shí)定量PCR、蛋白免疫印跡(Western Blot,WB)、亞細(xì)胞定位、遺傳轉(zhuǎn)化等技術(shù),對(duì)其功能進(jìn)行初步分析,為后期驗(yàn)證其功能打下基礎(chǔ),取得主要結(jié)果如下:(1)GA₃處理后(4℃)層積過(guò)程中,種子內(nèi)GA₃含量增加,種子萌發(fā)率提高;ABA處理后(4℃)層積過(guò)程中,種子內(nèi)ABA含量增加,種子萌發(fā)率降低。通過(guò)對(duì)層積過(guò)程中種子的含水量測(cè)定,繪制出天女木蘭種子吸水曲線,由此確定了干種子、層積第0 d、16 d、40 d、56 d這5個(gè)關(guān)鍵...

【文章頁(yè)數(shù)】：79 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 前言
    1.1 植物激素在種子休眠和萌發(fā)中的作用
        1.1.1 ABA在種子休眠中的作用
        1.1.2 ABA與GA相互作用調(diào)控種子的休眠和萌發(fā)
    1.2 種子萌發(fā)的吸水過(guò)程
    1.3 ABA受體研究進(jìn)展
    1.4 PYR/PYL/RCARs介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)通路相關(guān)調(diào)控因子
        1.4.1 負(fù)調(diào)控因子——PP2Cs
        1.4.2 正調(diào)控因子——SnRK2
    1.5 ABA受體PYR/PYL/RCARs基因家族介導(dǎo)的ABA信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑
    1.6 ABA受體PYR/PYL/RCARs基因家族相關(guān)功能研究
    1.7 研究目的與意義
第二章 不同激素處理對(duì)種子萌發(fā)率和內(nèi)源激素的影響
    2.1 試驗(yàn)材料
    2.2 試驗(yàn)方法
        2.2.1 材料處理
        2.2.2 種子含水量測(cè)定
        2.2.3 種子的萌芽率測(cè)定
        2.2.4 內(nèi)源激素測(cè)定
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 種子休眠解除過(guò)程中吸水特征以及關(guān)鍵時(shí)間點(diǎn)確定
        2.3.2 不同處理天女木蘭種子的萌發(fā)率
        2.3.3 天女木蘭種子在層積過(guò)程中的內(nèi)源激素含量的變化
    2.4 討論與小結(jié)
第三章 天女木蘭MsPYLs基因家族表達(dá)模式分析
    3.1 試驗(yàn)材料
    3.2 試驗(yàn)方法
        3.2.1 MsPYLs和 AtPYLs多序列比對(duì)、同源進(jìn)化分析
        3.2.2 材料處理
        3.2.3 植物總RNA提取
        3.2.4 反轉(zhuǎn)錄合成c DNA
        3.2.5 實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Quantitative Real-time PCR)
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 MsPYLs的序列分析
        3.3.2 MsPYLs基因家族在休眠種子中表達(dá)模式分析
        3.3.3 MsPYLs基因在不同處理的天女木蘭種子層積過(guò)程中的表達(dá)模式分析
    3.4 討論與小結(jié)
第四章 天女木蘭MsPYR1 基因的克隆及生物信息學(xué)分析
    4.1 試驗(yàn)材料
    4.2 試驗(yàn)方法
        4.2.1 MsPYR1 基因的克隆
        4.2.2 MsPYR1 基因的生物信息學(xué)分析
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 總RNA提取、檢測(cè)
        4.3.2 天女木蘭MsPYR1 基因的克隆
        4.3.3 MsPYR1 生物信息學(xué)分析
    4.4 討論與小結(jié)
第五章 天女木蘭MsPYR1 基因的功能分析
    5.1 試驗(yàn)材料
    5.2 試驗(yàn)方法
        5.2.1 材料處理
        5.2.2 種子的萌芽率測(cè)定
        5.2.3 MsPYR1 的表達(dá)分析
        5.2.4 不同激素處理層積過(guò)程中MsPYR1 基因在蛋白豐度上的變化
        5.2.5 MsPYR1 基因的亞細(xì)胞定位分析
        5.2.6 天女木蘭MsPYR1 基因在擬南芥中的遺傳轉(zhuǎn)化
    5.3 結(jié)果與分析
        5.3.1 MsPYR1 組織特異性分析
        5.3.2 不同濃度ABA處理對(duì)天女木蘭層積種子的萌芽率的影響
        5.3.3 MsPYR1 在不同濃度ABA處理的層積過(guò)程中表達(dá)模式
        5.3.4 ABA與 FL處理對(duì)種子萌芽率的影響
        5.3.5 ABA信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路相關(guān)基因的表達(dá)分析
        5.3.6 Western Blot分析不同激素處理層積過(guò)程中MsPYR1 在蛋白豐度上的變化
        5.3.7 MsPYR1 的亞細(xì)胞定位
        5.3.8 擬南芥培養(yǎng)情況
        5.3.9 轉(zhuǎn)基因擬南芥抗性篩選
    5.4 討論與小結(jié)
第六章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號(hào)：3818164