在蜂王漿中發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)功能的主要成分是蛋白質(zhì),特別是作為主要糖蛋白的蜂王漿主蛋白1(MRJP1)。MRJP1被認(rèn)為是蜂王漿過敏的主導(dǎo)蛋白,對蜂王漿過敏的人可能患有急性哮喘、接觸性皮炎、過敏反應(yīng),嚴(yán)重情況下會導(dǎo)致死亡。有研究發(fā)現(xiàn),糖蛋白的許多生理功能是在糖鏈的共同參與下完成的,甚至糖鏈的作用更直接、更突出,并且影響糖蛋白的構(gòu)象。為了進(jìn)一步探討糖鏈的作用,本研究在不切除糖鏈的情況下,利用天然MRJP1制備多克隆抗體具有重要意義。本論文的主要目的在于尋找有效的方法從多克隆抗體中純化出特異性更強(qiáng)的抗體IgG,并建立計(jì)算機(jī)檢索與人工手動檢索相結(jié)合分析抗體一級結(jié)構(gòu)的方法,初步表征多克隆抗體,為MRJP1多克隆抗體后續(xù)在體外診斷試劑和治療疾病藥物開發(fā)方面的應(yīng)用研究提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。主要研究結(jié)果如下:(1)MRJP1的提取與兔多克隆抗體制備:對MRJPs進(jìn)行超速離心,得到三層不同的溶液,UMRJPs中主要存在MRJP2和MRJP3;MMRJPs觀察到MRJP1、MRJP2和MRJP3均存在;LMRJPs的電泳結(jié)果顯示其主要為MRJP1,含量占比約為92.95%。利用分離得到的MRJP1進(jìn)行新西蘭大白兔免疫...

【文章頁數(shù)】：101 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
縮寫、符號清單、術(shù)語表
1 緒論
    1.1 蜂王漿主蛋白1的致敏性
    1.2 多克隆抗體研究現(xiàn)狀
        1.2.1 多克隆抗體
        1.2.2 多克隆抗體純化
    1.3 MRJP1 的抗體研究
    1.4 研究意義與內(nèi)容
        1.4.1 研究意義
        1.4.2 研究內(nèi)容
    1.5 研究技術(shù)路線
2 蜂王漿主蛋白1的多克隆抗體的制備及純化
    2.1 引言
    2.2 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.2.3 實(shí)驗(yàn)設(shè)備
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 MRJP1、MRJP2和MRJP3 的蛋白同源性分析
        2.3.2 蜂王漿主蛋白1(MRJP1)的純化
        2.3.3 MRJP1的SDS-PAGE驗(yàn)證
        2.3.4 MRJP1 多克隆抗體的制備
        2.3.5 多克隆抗體效價的測定
        2.3.6 多克隆抗體的純化
        2.3.7 抗體純化后的SDS-PAGE及 Native-PAGE驗(yàn)證
        2.3.8 數(shù)據(jù)分析處理
    2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論
        2.4.1 MRJP1、MRJP2和MRJP3 的蛋白同源性分析
        2.4.2 MRJP1的SDS-PAGE的結(jié)果分析
        2.4.3 MRJP1 抗體效價
        2.4.4 抗體純化后的電泳結(jié)果分析
    2.5 本章小結(jié)
3 MRJP1 多克隆抗體純化及其特異性鑒定
    3.1 引言
    3.2 實(shí)驗(yàn)材料
        3.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        3.2.3 實(shí)驗(yàn)設(shè)備
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 等電點(diǎn)聚焦電泳
        3.3.2 切膠純化
        3.3.3 制備電泳分離MRJP1、MRJP2和MRJP3
        3.3.4 各組分的特異性驗(yàn)證
        3.3.5 數(shù)據(jù)分析處理
    3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論
        3.4.1 等電點(diǎn)聚焦電泳測定結(jié)果
        3.4.2 切膠純化組分的SDS-PAGE驗(yàn)證
        3.4.3 制備電泳分離結(jié)果驗(yàn)證
        3.4.4 各組分的特異性驗(yàn)證結(jié)果
    3.5 本章小結(jié)
4 抗體的一級結(jié)構(gòu)鑒定
    4.1 引言
    4.2 實(shí)驗(yàn)材料
        4.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        4.2.3 實(shí)驗(yàn)設(shè)備
    4.3 實(shí)驗(yàn)方法
        4.3.1 蛋白膠內(nèi)酶切
        4.3.2 LC-MS/MS分析
        4.3.3 數(shù)據(jù)庫檢索分析與結(jié)果
        4.3.4 De novo檢索分析方法
        4.3.5 肽段二級質(zhì)譜b離子和y離子理論值質(zhì)荷比搜索
    4.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論
        4.4.1 重鏈一級結(jié)構(gòu)
        4.4.2 輕鏈一級結(jié)構(gòu)
    4.5 本章小結(jié)
5 結(jié)論與展望
    5.1 結(jié)論
    5.2 創(chuàng)新點(diǎn)
    5.3 展望
參考文獻(xiàn)
附錄
    附錄一:Peaks Studio搜庫結(jié)果
后記



本文編號：3809352