禽白血病(Avian Leukosis,AL)是由禽白血病病毒(Avian leukosis virus,ALV)引起對(duì)家禽危害較大的一種以垂直及水平方式進(jìn)行傳播的腫瘤性疾病。該病發(fā)病率為3%?5%,病程長(zhǎng),嚴(yán)重增加家禽養(yǎng)殖業(yè)的損失。目前對(duì)于該病沒有有效的藥物及疫苗。因此,本研究對(duì)河北地區(qū)AL展開流行病學(xué)調(diào)查,及主要流行亞群gp85基因進(jìn)行了原核表達(dá)及真核表達(dá),并對(duì)其進(jìn)行了免疫效果的初步研究。研究?jī)?nèi)容和結(jié)果如下:1.河北地區(qū)種雞ALV p27攜帶情況、流行亞群及其分子特征分析本研究通過對(duì)河北地區(qū)種雞場(chǎng)采集種蛋和肛拭子樣本(共包含6個(gè)地區(qū)的7個(gè)種雞場(chǎng)3496份樣品,其中地方品種2533份、引進(jìn)品種159份、培育品種804份),利用p27抗原ELISA試劑盒檢測(cè)ALV p27攜帶情況,結(jié)果顯示2018-2019年河北地區(qū)種雞場(chǎng)的陽(yáng)性率達(dá)85.71%,個(gè)體平均陽(yáng)性率達(dá)13.79%,地方品種陽(yáng)性率達(dá)18.91%,引進(jìn)品種陽(yáng)性率為1.26%,培育品種陽(yáng)性率僅為0.12%;采用PCR方法檢測(cè)2018-2019年主要流行亞群,結(jié)果顯示J亞群檢出率為13.79%,E亞群檢出率為13.70%,A亞群檢出...

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
縮略詞
摘要
ABSTRACT
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 禽白血病病原學(xué)
        1.1.1 ALV的分類
        1.1.2 ALV結(jié)構(gòu)特征
        1.1.3 ALV理化特性
    1.2 ALV基因組及蛋白結(jié)構(gòu)
        1.2.1 Gag基因編碼的蛋白
        1.2.2 Pol基因編碼的蛋白
        1.2.3 Env基因編碼的蛋白
    1.3 AL流行病學(xué)
        1.3.1 AL的宿主范圍
        1.3.2 ALV的傳播途徑
    1.4 AL的臨床癥狀及病理變化
    1.5 AL的檢測(cè)診斷方法
        1.5.1 病毒的分離鑒定
        1.5.2 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)
        1.5.3 核酸斑點(diǎn)雜交試驗(yàn)
        1.5.4 免疫熒光技術(shù)
        1.5.5 快速檢測(cè)試紙條
        1.5.6 PCR技術(shù)
    1.6 AL的防制
        1.6.1 滅活疫苗
        1.6.2 活疫苗
        1.6.3 基因工程疫苗
    1.7 本課題研究的目的及意義
第二章 河北地區(qū)種雞ALVp27攜帶情況、流行亞群及分子特征分析
    2.1 試驗(yàn)材料
        2.1.1 樣品來(lái)源
        2.1.2 主要儀器設(shè)備
        2.1.3 主要試劑
    2.2 試驗(yàn)方法
        2.2.1 樣品的處理
        2.2.2 樣品中ALVp27抗原檢測(cè)
        2.2.3 ALp27陽(yáng)性樣品亞群檢測(cè)
        2.2.4 ALV-J gp85 分子特征分析
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 ALVp27攜帶情況
        2.3.2 ALV亞群檢測(cè)情況
        2.3.3 ALV-J gp85 序列分析
    2.4 討論
    2.5 小結(jié)
第三章 ALV-J囊膜蛋白gp85 原核表達(dá)及免疫效力評(píng)價(jià)
    3.1 試驗(yàn)材料
        3.1.1 菌株、表達(dá)載體、ALV-J病毒及試驗(yàn)動(dòng)物
        3.1.2 主要儀器
        3.1.3 主要試劑
    3.2 試驗(yàn)方法
        3.2.1 ALV基因組的提取
        3.2.2 ALV-J gp85 引物的設(shè)計(jì)及合成
        3.2.3 ALV-J gp85 基因克隆與純化
        3.2.4 重組表達(dá)質(zhì)粒pET-32a-gp85 的構(gòu)建
        3.2.5 原核蛋白gp85 的表達(dá)及Western blot檢測(cè)
        3.2.6 重組蛋白gp85特異性免疫效果測(cè)定
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 gp85 基因克隆與原核表達(dá)質(zhì)粒pET-32a-gp85 的構(gòu)建
        3.3.2 重組蛋白gp85的表達(dá)驗(yàn)證
        3.3.3 pET-32a-gp85 蛋白表達(dá)的可溶性分析及純化
        3.3.4 Western blot分析重組蛋白gp85 的免疫原性
        3.3.5 gp85蛋白免疫對(duì)雛雞血清特異性抗體gp85的影響
        3.3.6 不同劑量免疫攻毒后雞ALVp27陽(yáng)性數(shù)及保護(hù)率分析
    3.4 討論
    3.5 小結(jié)
第四章 ALV-J gp85 真核蛋白在293T細(xì)胞中的表達(dá)及免疫效果評(píng)價(jià)
    4.1 試驗(yàn)材料
        4.1.1 質(zhì)粒、病毒及細(xì)胞株
        4.1.2 主要儀器
        4.1.3 主要試劑
    4.2 試驗(yàn)方法
        4.2.1 引物的設(shè)計(jì)合成及gp85基因擴(kuò)增
        4.2.2 pMD-18T-gp85 基因的克隆、測(cè)序
        4.2.3 重組質(zhì)粒pEGFP-N1-gp85 的構(gòu)建
        4.2.4 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        4.2.5 pEGFP-N1-gp85 重組蛋白在293T細(xì)胞中的表達(dá)
        4.2.6 Western blot檢測(cè)pEGFP-N1-gp85 的表達(dá)情況
        4.2.7 ALV-J gp85 真核蛋白的免疫效果評(píng)價(jià)
    4.3 結(jié)果
        4.3.1 ALV-J gp85 基因擴(kuò)增
        4.3.2 重組質(zhì)粒的雙酶切鑒定
        4.3.3 pEGFP-N1-gp85在293T細(xì)胞中的表達(dá)
        4.3.4 Western blot分析pEGFP-N1-gp85在293T細(xì)胞中的表達(dá)
        4.3.5 血清抗體特異性檢測(cè)
        4.3.6 血清抗體水平檢測(cè)
        4.3.7 外周血T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率測(cè)定
        4.3.8 不同劑量免疫攻毒后雞ALVp27陽(yáng)性數(shù)及保護(hù)率
    4.4 討論
    4.5 小結(jié)
全文總結(jié)
參考文獻(xiàn)
發(fā)表論文和參加科研情況說明
論文受資助情況
致謝



本文編號(hào)：3789843