發(fā)布時(shí)間：2022-11-08 22:41

　　擬南芥抗白粉病基因RPW8.1能夠觸發(fā)植物在侵染點(diǎn)產(chǎn)生過敏反應(yīng)（hypersensitive response,HR）,從而阻止病原菌的入侵。為了明確RPW8.1是如何調(diào)控植物的抗病反應(yīng),用一個(gè)表達(dá)RPW8.1-eYFP的轉(zhuǎn)基因系R1Y4為基礎(chǔ)材料,通過EMS誘變得到一系列突變體。通過表型分析,選取了一個(gè)細(xì)胞死亡明顯增強(qiáng)的突變體B7-6,該突變體對白粉菌的抗性強(qiáng)于R1Y4。用PAMP分子flg22或chitin誘導(dǎo)的基礎(chǔ)免疫反應(yīng),包括程序性細(xì)胞死亡、胼胝質(zhì)的沉積以及活性氧的爆發(fā)等在突變體B7-6中比在R1Y4中更加強(qiáng)烈；而且,突變體中RPW8.1的轉(zhuǎn)錄水平和RPW8.1-eYFP的積累量都顯著高于RIY4。前期實(shí)驗(yàn)通過圖位克隆的方法成功地找到了造成該表型的突變基因在At5g12380第280位堿基有一個(gè)A到G的點(diǎn)突變,導(dǎo)致了第94位氨基酸殘基由丙氨酸（A）變?yōu)樘K氨酸（T）,該基因編碼一個(gè)膜聯(lián)蛋白（ANNEXIN8,ANN8）;互補(bǔ)實(shí)驗(yàn)證明了確實(shí)是At5g12380基因的突變導(dǎo)致細(xì)胞死亡增強(qiáng)的表型。因此,我們推測,ANN8在RPW8.1介導(dǎo)的抗性反應(yīng)中可能起負(fù)調(diào)控作用。在本研究中,我們構(gòu)... 

【文章頁數(shù)】：59 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
符號(hào)說明
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 植物的天然免疫系統(tǒng)
        1.1.1 病原相關(guān)分子模式觸發(fā)的免疫反應(yīng)(PTI)
        1.1.2 效應(yīng)因子觸發(fā)的免疫反應(yīng)(ETI)
    1.2 植物R基因與病原菌無毒(Avr)基因的互作模式
        1.2.1 R基因與Avr基因的直接互作模式(受體—配體模式)
        1.2.2 R基因與Avr基因的間接互作模式
        1.2.3 Avr基因?qū)基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控
    1.3 擬南芥中廣譜抗病蛋白R(shí)PW8的研究進(jìn)展
        1.3.1 RPW8的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)
        1.3.2 RPW8的研究進(jìn)展
        1.3.3 RPW8.1和RPW8.2功能對比
    1.4 膜聯(lián)蛋白(Annexin)的研究進(jìn)展
        1.4.1 膜聯(lián)蛋白(Annexin)功能概述
        1.4.2 擬南芥膜聯(lián)蛋白家族同源進(jìn)化關(guān)系分析
        1.4.3 擬南芥中Annexin的研究進(jìn)展
    1.5 論文研究目的及意義
第二章 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 擬南芥材料
        2.1.2 工程菌和病原菌
        2.1.3 質(zhì)粒載體
        2.1.4 分子生物學(xué)試劑
        2.1.5 試劑盒
        2.1.6 抗生素
        2.1.7 培養(yǎng)基
        2.1.8 主要的儀器設(shè)備
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 ANN8 cDNA的制備
        2.2.2 ANN8超表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.2.3 擬南芥的栽培與遺傳轉(zhuǎn)化
        2.2.4 蛋白質(zhì)印跡檢測(western blot)
        2.2.5 RNA的提取和反轉(zhuǎn)
        2.2.6 擬南芥DNA的提取(SDS法)
        2.2.7 擬南芥蛋白質(zhì)的提取
        2.2.8 擬南芥細(xì)胞死亡染色觀察(Trypan Blue)
        2.2.9 活性氧爆發(fā)(ROS)的測定
        2.2.10 細(xì)菌生長實(shí)驗(yàn)
        2.2.11 白粉菌接菌實(shí)驗(yàn)及分生孢子數(shù)量統(tǒng)計(jì)
第三章 結(jié)果與分析
    3.1 過表達(dá)ANN8轉(zhuǎn)基因植株的鑒定
    3.2 過表達(dá)ANN8減弱了RPW8.1介導(dǎo)的抗病性
    3.3 過表達(dá)ANN8減弱了RPW8.1介導(dǎo)的基礎(chǔ)免疫反應(yīng)
    3.4 過表達(dá)ANN8降低了RPW8.1的轉(zhuǎn)錄水平
    3.5 過表達(dá)ANN8降低了R1Y4中PR1和FRK1基因的表達(dá)量
    3.6 ANN8缺失突變體ann8-1增強(qiáng)植物根對鹽的敏感性
第四章 討論與展望
    4.1 ANN8在RPW8.1介導(dǎo)的抗性反應(yīng)中起負(fù)調(diào)控作用
    4.2 ANN8缺失突變體ann8-1增強(qiáng)植物根對鹽的敏感性
    4.3 展望
        4.3.1 ANN8調(diào)控機(jī)制的探索
        4.3.2 RPW8.1和ANN8在植物免疫反應(yīng)中內(nèi)在聯(lián)系的探索
參考文獻(xiàn)
附錄 附表.引物
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]植物天然免疫系統(tǒng)研究進(jìn)展[J]. 陳英,譚碧玥,黃敏仁.  南京林業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2012(01)
[2]植物抗病基因（R）與病原物無毒基因（Avr）相互作用機(jī)制的研究進(jìn)展[J]. 何鋒,王長春,王鋒青,楊玲.  中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報(bào). 2011(09)
[3]植物三型信號(hào)分泌系統(tǒng)下的抗病基因防御機(jī)制[J]. 張茵.  中國農(nóng)學(xué)通報(bào). 2007(06)
[4]病程相關(guān)基因非表達(dá)子1（NPR1）:植物抗病信號(hào)網(wǎng)絡(luò)中的關(guān)鍵節(jié)點(diǎn)[J]. 張紅志,蔡新忠.  生物工程學(xué)報(bào). 2005(04)



本文編號(hào)：3704685