發(fā)布時間：2022-08-11 21:29

　　本研究的目的是構(gòu)建藏系綿羊Gasdermin基因家族成員GSDMA基因的表達載體,在細胞水平上探索GSDMA基因在毛囊細胞中可能發(fā)揮的調(diào)控機制,為進一步研究綿羊GSDMA基因在毛囊發(fā)育與周期變化中的功能提供理論基礎。試驗以藏系綿羊母羊為研究對象,從皮膚中克隆了藏系綿羊GSDMA基因序列,并以此為基礎構(gòu)建了皮膚特異的真核表達載體,進一步轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)的人毛囊內(nèi)根鞘細胞（Human hair inner root sheath cells,HHIRSC）,利用熒光定量PCR及Western blot檢測藏系綿羊GSDMA基因以及與毛囊生長發(fā)育相關(guān)的Wnt通路信號分子β-catenin基因m RNA和蛋白質(zhì)水平的變化。主要研究成果如下:（1）獲得了藏系綿羊GSDMA基因的CDS編碼區(qū)序列,長度為1341 bp。CDS區(qū)序列比對顯示,GSDMA基因與預測的綿羊序列存2個堿基差異,但氨基酸序列相同。（2）以pCDs Red2-KI真核載體為骨架,構(gòu)建了含KAP6.1皮膚特異表達啟動子的GSDMA基因重組真核載體p CDs R-KG。（3）將p CDs R-KG轉(zhuǎn)染HHIRSC,用流式細胞術(shù)分選紅色... 

【文章頁數(shù)】：49 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
前言
第1章 文獻綜述
    1 毛囊與羊絨毛性狀
    2 羊絨毛性狀的主要候選基因
        2.1 BMP基因家族
        2.2 Hox基因家族
        2.3 FGFs
        2.4 胰島素樣生長因子
        2.5 GSDMA
第2章 藏系綿羊GSDMA基因的克隆與表達載體的構(gòu)建
    1 實驗材料
        1.1 樣品的采集與處理
        1.2 主要試劑與儀器
    2 實驗方法
        2.1 總RNA的提取與PCR擴增
        2.2 基因的克隆測序及雙酶切引物設計
        2.3 含酶切位點GSDMA基因和pCDsRed2-KI載體的擴增
        2.4 皮膚特異表達載體pCDsR-KG的構(gòu)建
        2.5 pCDsR-KG載體的鑒定
    3 結(jié)果與分析
        3.1 藏系綿羊GSDMA基因的PCR擴增
        3.2 GSDMA的基因克隆
        3.3 測序及分析
        3.4 GSDMA基因擴增和真核載體的轉(zhuǎn)化
        3.5 pCDsRed2-KG真核載體的鑒定
    4.討論
第3章 GSDMA基因真核載體的轉(zhuǎn)染及功能分析
    1 實驗材料
        1.1 樣品
        1.2 主要試劑與儀器
    2 實驗方法
        2.1 HHIRSC細胞的復蘇與傳代
        2.2 轉(zhuǎn)染條件優(yōu)化
        2.3 pCDsR-KG載體的轉(zhuǎn)染與篩選
        2.4 流式細胞術(shù)篩選轉(zhuǎn)染細胞
        2.5 篩選后細胞RNA及總蛋白的獲得
        2.6 GSDMA及 β-catenin基因熒光定量PCR分析
        2.7 Western blot分析 β-catenin蛋白表達差異
    3 結(jié)果與分析
        3.1 轉(zhuǎn)染條件優(yōu)化
        3.2 轉(zhuǎn)染結(jié)果分析
        3.3 流式細胞術(shù)篩選轉(zhuǎn)染細胞
        3.4 實驗細胞RNA及總蛋白的獲得
        3.5 GSDMA及 β-catenin基因的定量
        3.6 β-catenin基因的蛋白水平分析
    4 討論
結(jié)論
參考文獻
附錄
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
[1]成纖維細胞生長因子5（FGF5）基因cDNA克隆及在不同品種綿羊和山羊中的多態(tài)性研究[D]. 高愛琴.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學 2005
[2]內(nèi)蒙古絨山羊毛囊發(fā)育、生長周期及相關(guān)基因的研究[D]. 尹俊.內(nèi)蒙古大學 2004

碩士論文
[1]角蛋白關(guān)聯(lián)蛋白基因（KAP和KRT）與綿羊毛品質(zhì)的相關(guān)性研究[D]. 許漢峰.石河子大學 2008



本文編號：3675424