牛流行熱病毒（Bovine ephemeral fever virus,BEFV）是引起牛流行熱（Bovine ephemeral fever,BEF）的病原體,能夠引起病牛高熱、呼吸困難、奶牛產(chǎn)奶量下降、生育率下降等臨床癥狀,給養(yǎng)牛業(yè)造成巨大損失,嚴重影響經(jīng)濟效益,農(nóng)業(yè)部已于2014年將牛流行熱列為重點防控的牛傳染病之一。目前對于該病的防控主要以疫苗免疫為主,但防控效果不理想。因此,深入研究BEFV復制的分子機制,尤其是宿主蛋白與病毒蛋白相互作用調(diào)控病毒復制的機制,以期發(fā)現(xiàn)新的藥物靶點,為抗病毒藥物的研發(fā)提供新思路。膜聯(lián)蛋白A2（Annexin A2,AnxA2）是一種Ca²⁺依賴的磷脂結(jié)合蛋白,參與調(diào)節(jié)胞吞、胞吐、膜結(jié)構(gòu)域的形成、細胞增殖等,其N端結(jié)構(gòu)域可影響該蛋白在細胞中的定位及功能,C端結(jié)構(gòu)域是AnxA2蛋白與其它蛋白結(jié)合并發(fā)揮作用的基礎(chǔ)。盡管AnxA2調(diào)控非洲豬瘟病毒等的復制,但尚未見AnxA2參與BEFV復制的報道。BEFV基質(zhì)蛋白（M）,是由M基因編碼的脂雙層內(nèi)膜蛋白,分布于病毒包膜與核衣殼之間。與BEFV同為彈狀病毒科的狂犬病毒、水泡性口炎病毒等病... 

【文章頁數(shù)】：90 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
符號說明
第一章 綜述
    1 BEFV綜述
        1.1 BEF簡介
        1.2 BEF流行病學
        1.3 BEFV結(jié)構(gòu)及其基因功能
        1.4 BEFV的復制機制
        1.5 BEF防控
    2 AnxA2 綜述
        2.1 AnxA2 簡述
        2.2 AnxA2 基因結(jié)構(gòu)
        2.3 AnxA2 與病毒的關(guān)系
    3 研究目的及意義
第二章 AnxA2 促進BEFV的釋放
    1 實驗材料
        1.1 實驗毒株和細胞
        1.2 實驗試劑
        1.3 試劑配制
        1.4 主要儀器及設(shè)備
    2 實驗方法
        2.1 mRNA水平的影響
        2.2 蛋白水平的驗證
        2.3 過表達AnxA2對BEFV釋放的影響
        2.4 沉默AnxA2對BEFV釋放的影響
        2.5 統(tǒng)計學分析
    3 實驗結(jié)果
        3.1 BEFV感染上調(diào)AnxA2 mRNA表達
        3.2 BEFV感染上調(diào)AnxA2 蛋白表達
        3.3 過表達AnxA2 促進BEFV的釋放
        3.4 沉默AnxA2 抑制BEFV的釋放
    4 討論
第三章 AnxA2與BEFV M蛋白相互作用
    1 實驗材料
        1.1 實驗細胞
        1.2 實驗試劑
        1.3 試劑配制
        1.4 主要儀器及設(shè)備
    2 實驗方法
        2.1 M原核表達載體的構(gòu)建及蛋白純化
        2.2 AnxA2 基因引物設(shè)計
        2.3 GST-Pull down
        2.4 免疫共沉淀(Co-IP)
        2.5 AnxA2 蛋白結(jié)構(gòu)域的劃分
        2.6 AnxA2 缺失突變體引物的設(shè)計及表達載體的構(gòu)建
        2.7 統(tǒng)計學分析
    3 實驗結(jié)果
        3.1 GST-Pull down檢測發(fā)現(xiàn),AnxA2與M蛋白存在相互作用
        3.2 免疫共沉淀驗證AnxA2與M蛋白存在相互作用
        3.3 定位M與 AnxA2 蛋白的結(jié)合位點為第V段結(jié)構(gòu)域
    4 討論
第四章 M促進BEFV的釋放
    1 實驗材料
        1.1 實驗細胞
        1.2 實驗試劑
        1.3 試劑配制
        1.4 主要儀器及設(shè)備
    2 實驗方法
        2.1 M蛋白對BEFV釋放的影響
        2.2 統(tǒng)計學分析
    3 實驗結(jié)果
        3.1 M促進BEFV的釋放
    4 討論
第五章 AnxA2 通過調(diào)控M在細胞膜的定位促進BEFV的釋放
    1 實驗材料
        1.1 實驗細胞
        1.2 實驗試劑
        1.3 試劑配制
        1.4 主要儀器及設(shè)備
    2 實驗方法
        2.1 膜蛋白與細胞組分分離實驗
        2.2 統(tǒng)計學分析
    3 實驗結(jié)果
        3.1 AnxA2 促進M蛋白在細胞膜上的定位
        3.2 缺失AnxA2-V抑制BEFV的釋放
    4 討論
第六章 結(jié)論
參考文獻
攻讀學位期間發(fā)表論文
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]牛流行熱的發(fā)病特點及防治辦法[J]. 王炳會.  農(nóng)民致富之友. 2015(12)
[2]牛流行熱研究進展[J]. 李志,鄭福英,王積棟,高閃電,殷宏.  中國畜牧獸醫(yī). 2015(03)
[3]Annexin A2在病毒感染中的作用[J]. 陳福旺,張?zhí)?曹宇航,楊鑫,逄大欣,歐陽紅生,任林柱.  畜牧與獸醫(yī). 2012(S1)
[4]膜聯(lián)蛋白的功能與調(diào)控研究進展[J]. 黃逸群,左開井.  生物技術(shù)進展. 2012(03)



本文編號：3664110