發(fā)布時(shí)間：2022-02-20 22:48

　　隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展,RNA干擾（RNA interference,RNAi）成為了有效防治植物病害的新方法。本研究通過病毒誘導(dǎo)的基因沉默（virus-induced gene silencing,VIGS）體系分別篩選出抑制煙草花葉病毒（tobacco mosaic virus,TMV）、黃瓜花葉病毒（cucumber mosaic virus,CMV）、馬鈴薯Y病毒（potato virus Y,PVY）和煙草靶斑病菌最有效的靶點(diǎn),然后體外轉(zhuǎn)錄同時(shí)靶向這三種病毒最有效靶點(diǎn)的雙鏈RNA（double-stranded RNA,dsRNA）,以及靶向煙草靶斑病菌（Rhizoctonia solani）有效靶點(diǎn)的dsRNA,并將它們應(yīng)用到煙草植株上,通過RT-qPCR（Real time quantitative RT-PCR）分別檢測它們對(duì)這三種煙草病毒病和靶斑病的抑制效果,主要研究成果如下:1.以TMV、CMV、PVY多個(gè)核酸序列作為沉默靶點(diǎn),分別構(gòu)建了VIGS載體并檢測了其沉默效果。本研究以煙草脆裂病毒（TRV）為載體,選取TMV的p126、p183、MP、CP、3’UTR的核... 

【文章來源】：沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：78 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
前言
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 雙鏈RNA和 RNA干擾的研究進(jìn)展
        1.1.1 雙鏈RNA的形成與RNA干擾的發(fā)現(xiàn)
        1.1.2 RNA干擾的作用機(jī)制與特點(diǎn)
        1.1.3 RNA干擾在植物抗病研究方面的應(yīng)用
        1.1.4 植物病毒載體在RNA干擾方面的應(yīng)用
    1.2 三種重要煙草病毒病的研究進(jìn)展
        1.2.1 煙草花葉病毒(TMV)的研究進(jìn)展
        1.2.2 黃瓜花葉病毒(CMV)的研究進(jìn)展
        1.2.3 馬鈴薯Y病毒(PVY)的研究進(jìn)展
        1.2.4 煙草病毒病的防治現(xiàn)狀
    1.3 煙草靶斑病的研究進(jìn)展
        1.3.1 病害發(fā)生情況
        1.3.2 危害癥狀
        1.3.3 病原菌
        1.3.4 重要致病基因
        1.3.5 煙草靶斑病的防治現(xiàn)狀
第二章 三種病毒靶標(biāo)序列的獲得及VIGS載體的構(gòu)建
    2.1 材料與方法
        2.1.1 試驗(yàn)材料
        2.1.2 TMV,CMV和 PVY誘導(dǎo)的VIGS體系的建立及沉默檢測
        2.1.3 TMV-p126,CMV-2a和 PVY-HC-pro核酸片段融合VIGS載體的構(gòu)建及基因沉默效果檢測
    2.2 結(jié)果與分析
        2.2.1 TMV,CMV和 PVY誘導(dǎo)的VIGS體系的建立及沉默效果分析
        2.2.2 核酸序列融合的VIGS沉默效果及分析
    2.3 小結(jié)
第三章 煙草靶斑病菌靶標(biāo)序列的獲得及VIGS體系的建立
    3.1 材料與方法
        3.1.1 試驗(yàn)材料
        3.1.2 試驗(yàn)方法
    3.2 結(jié)果與分析
        3.2.1 RPMK1 基因和endoPGs基因的獲得
        3.2.2 pTRV-RPMK1和pTRV-endoPGs重組表達(dá)載體轉(zhuǎn)入大腸桿菌
        3.2.3 TRV-RPMK1和TRV-endoPGs誘導(dǎo)的VIGS體系的沉默效果及分析
    3.3 小結(jié)
第四章 雙鏈RNA的表達(dá)及抗病性的初步分析
    4.1 材料與方法
        4.1.1 試驗(yàn)材料
        4.1.2 三種病毒序列和煙草靶斑病菌基因序列的dsRNA的表達(dá)
        4.1.3 外源dsRNA的應(yīng)用
    4.2 結(jié)果與分析
        4.2.1 載體pT-3FF的菌落PCR鑒定
        4.2.2 表達(dá)dsRNA-3FF,dsRNA-RPMK1,dsRNA-endoPGs和 dsRNA-GFP的模板制備
        4.2.3 dsRNA-3FF,dsRNA-RPMK1,dsRNA-endoPGs和 dsRNA-GFP的表達(dá)
        4.2.4 外源dsRNA-3FF對(duì)三種病毒的抑制效果分析
        4.2.5 外源dsRNA-RPMK1和dsRNA-endoPGs對(duì)靶斑病菌的抑制效果分析
    4.3 小結(jié)
第五章 結(jié)論與討論
    5.1 病毒誘導(dǎo)的基因沉默(VIGS)對(duì) TMV,CMV和 PVY的抑制效果
    5.2 病毒誘導(dǎo)的基因沉默(VIGS)對(duì)煙草靶斑病的抑制效果
    5.3 外源dsRNA抗三種煙草病毒(TMV,CMV和 PVY)和煙草靶斑病菌
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀碩士期間發(fā)表論文情況


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[10]煙草靶斑病菌內(nèi)切多聚半乳糖醛酸酶基因endoPGs的克隆及表達(dá)特征分析[J]. 趙艷琴,吳元華,趙秀香,陳建光,伏穎,安夢(mèng)楠.  中國農(nóng)業(yè)科學(xué). 2014(10)



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