紅花（Carthamus tinctorius L.）,為菊科紅花屬草本植物。目前,全世界菊科紅花屬植物約有25種,而在我國(guó),僅有紅花一種。紅花具有較強(qiáng)的抗旱和抗寒的能力,主要栽種于我國(guó)河南、新疆、四川、浙江等地區(qū)。轉(zhuǎn)錄因子Dof是植物所特有的一類轉(zhuǎn)錄因子,能夠響應(yīng)光的應(yīng)答,參與代謝調(diào)節(jié),從而影響種子的萌發(fā)和成熟,還能夠參與抗逆反應(yīng),提高植物的抗性等,在植物的生長(zhǎng)發(fā)育過程中發(fā)揮著重要的作用。本研究以“吉紅一號(hào)”紅花為實(shí)驗(yàn)材料,克隆CtDof基因,對(duì)其在不同組織及種子不同發(fā)育階段的表達(dá)水平進(jìn)行分析,同時(shí)構(gòu)建超表達(dá)載體轉(zhuǎn)化擬南芥,鑒定其功能。主要研究結(jié)果如下:1.在紅花不同組織部位之間,紅花Dof基因家族中的Unigene100791基因（CtDof1）的相對(duì)表達(dá)量最高,尤其是在成熟種子中,Unigene100791基因的相對(duì)表達(dá)量分別是Unigene39146基因的12.2倍,Unigene41817基因的2.2倍,Unigene71654基因的1.8倍,Unigene97057基因的3.9倍;在種子發(fā)育16天時(shí)Unigene100791基因的相對(duì)表達(dá)量最高,分別是Unigene3914... 

【文章來(lái)源】：長(zhǎng)春師范大學(xué)吉林省

【文章頁(yè)數(shù)】：90 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 緒論
    1.1 紅花的簡(jiǎn)述
        1.1.1 紅花的起源與分布
        1.1.2 紅花主要的化學(xué)成分及藥理活性
        1.1.3 紅花的應(yīng)用
    1.2 轉(zhuǎn)錄因子的概述
        1.2.1 轉(zhuǎn)錄因子的定義
        1.2.2 轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)構(gòu)特征
        1.2.3 轉(zhuǎn)錄因子的生物學(xué)功能
    1.3 Dof轉(zhuǎn)錄因子的概述
        1.3.1 Dof轉(zhuǎn)錄因子的定義
        1.3.2 Dof轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)構(gòu)特征
        1.3.3 Dof轉(zhuǎn)錄因子的生物學(xué)功能
    1.4 研究的內(nèi)容與意義
第2章 紅花CtDof基因家族的表達(dá)分析
    2.1 前言
    2.2 實(shí)驗(yàn)材料、試劑和儀器
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.2.3 實(shí)驗(yàn)儀器
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 實(shí)時(shí)熒光定量PCR引物的設(shè)計(jì)
        2.3.2 實(shí)時(shí)熒光定量PCR反應(yīng)cDNA的制備
        2.3.3 Real-Time PCR反應(yīng)體系及反應(yīng)條件
    2.4 結(jié)果與分析
        2.4.1 紅花CtDof基因熒光定量PCR的擴(kuò)增效率考察
        2.4.2 在紅花不同組織部位的相對(duì)表達(dá)量
        2.4.3 在紅花種子不同發(fā)育時(shí)期的相對(duì)表達(dá)量
    2.5 討論
第3章 紅花CtDof1基因的克隆及生物信息學(xué)分析
    3.1 前言
    3.2 實(shí)驗(yàn)材料、試劑和儀器
        3.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        3.2.3 實(shí)驗(yàn)儀器
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 總RNA的提取
        3.3.2 總RNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA
        3.3.3 紅花CtDof1中間片段的克隆
        3.3.4 紅花CtDof13’末端的克隆
        3.3.5 紅花CtDof1基因的克隆
        3.3.6 紅花CtDof1基因的生物信息學(xué)分析
    3.4 結(jié)果與分析
        3.4.1 紅花種子總RNA的檢測(cè)
        3.4.2 紅花CtDof1基因中間片段在紅花基因組中的驗(yàn)證
        3.4.3 紅花CtDof1基因 3’RACE的克隆
        3.4.4 紅花CtDof1基因全長(zhǎng)基因的克隆
        3.4.5 紅花CtDof1基因及編碼蛋白的生物信息學(xué)分析
    3.5 討論
第4章 紅花CtDof1基因的功能驗(yàn)證
    4.1 前言
    4.2 實(shí)驗(yàn)材料、試劑和儀器
        4.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        4.2.3 實(shí)驗(yàn)儀器
    4.3 實(shí)驗(yàn)方法
        4.3.1 目的基因引物的設(shè)計(jì)
        4.3.2 目的基因的克隆
        4.3.3 紅花CtDof1基因植物超表達(dá)載體的連接
        4.3.4 紅花CtDof1基因在植物中的超表達(dá)
        4.3.5 CtDof1轉(zhuǎn)基因擬南芥在鹽脅迫應(yīng)答中的功能
    4.4 結(jié)果與分析
        4.4.1 紅花CtDof1基因植物超表達(dá)載體的構(gòu)建
        4.4.2 紅花CtDof1基因在擬南芥中的超表達(dá)
        4.4.3 紅花CtDof1基因在紅花中的超表達(dá)
        4.4.4 CtDof1轉(zhuǎn)基因擬南芥在鹽脅迫應(yīng)答中的功能
    4.5 討論
第5章 紅花CtDof1基因原核表達(dá)載體的構(gòu)建及誘導(dǎo)分析
    5.1 前言
    5.2 實(shí)驗(yàn)材料、試劑和儀器
        5.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        5.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        5.2.3 實(shí)驗(yàn)儀器
    5.3 實(shí)驗(yàn)方法
        5.3.1 目的基因引物的設(shè)計(jì)
        5.3.2 紅花CtDof1基因原核表達(dá)載體的構(gòu)建
        5.3.3 紅花CtDof1基因的誘導(dǎo)表達(dá)
        5.3.4 誘導(dǎo)表達(dá)的產(chǎn)物檢測(cè)
    5.4 結(jié)果與分析
    5.5 討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
作者在攻讀碩士學(xué)位期間主要研究成果
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]巴西橡膠樹HbMYB52基因的克隆及其在擬南芥中的表達(dá)[J]. 仇鍵,劉彤,王帆,魏芳,高宏華,楊文鳳,吳明,羅世巧,�，F(xiàn)周.  熱帶亞熱帶植物學(xué)報(bào). 2016(06)
[2]番茄NP24基因超表達(dá)載體的構(gòu)建[J]. 趙敬一,張喜春.  中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào). 2016(16)
[3]胡蘿卜中DcDofD1轉(zhuǎn)錄因子的克隆及其對(duì)非生物逆境脅迫的響應(yīng)分析[J]. 卻楓,黃瑩,王楓,徐志勝,王廣龍,熊愛生.  植物遺傳資源學(xué)報(bào). 2015(05)
[4]馬鈴薯基因組中Dof轉(zhuǎn)錄因子家族的鑒定與表達(dá)特征分析[J]. 吳智明,張圣旭,梁關(guān)生.  核農(nóng)學(xué)報(bào). 2015(07)
[5]鹽脅迫對(duì)植物的影響及植物對(duì)鹽脅迫的適應(yīng)性[J]. 韓志平,張海霞,周鳳.  山西大同大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2015(03)
[6]調(diào)控植物類黃酮生物合成的MYB轉(zhuǎn)錄因子研究進(jìn)展[J]. 邢文,金曉玲.  分子植物育種. 2015(03)
[7]幾種新型植物基因表達(dá)載體的構(gòu)建方法[J]. 張陽(yáng)璞,楊淑慎.  生物工程學(xué)報(bào). 2015(03)
[8]紅花藥理作用及其開發(fā)與應(yīng)用研究進(jìn)展[J]. 易善勇,官麗莉,楊晶,李海燕,李校堃,姜潮,黃建.  北方園藝. 2015(05)
[9]WRKY轉(zhuǎn)錄因子在植物生長(zhǎng)發(fā)育中的調(diào)控作用[J]. 張婷婷,田云,盧向陽(yáng).  化學(xué)與生物工程. 2014(08)
[10]植物花青素合成代謝途徑及其分子調(diào)控[J]. 賈趙東,馬佩勇,邊小峰,楊清,郭小丁,謝一芝.  西北植物學(xué)報(bào). 2014(07)

博士論文
[1]泥蚶高通量轉(zhuǎn)錄組分析及生長(zhǎng)相關(guān)基因的克隆與表達(dá)研究[D]. 董迎輝.中國(guó)海洋大學(xué) 2012

碩士論文
[1]紅花黃色素生物合成轉(zhuǎn)錄因子基因CtMYB1的克隆、表達(dá)分析及功能初步研究[D]. 張雪.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015
[2]云南紅梨果皮轉(zhuǎn)錄因子MYB、bHLH和WD40互作及調(diào)控果皮著色機(jī)理研究[D]. 崔道雷.昆明理工大學(xué) 2013
[3]人肌紅蛋白基因合成、原核表達(dá)及單克隆抗體制備[D]. 安星蘭.東北林業(yè)大學(xué) 2012
[4]ERF轉(zhuǎn)錄因子LeERF2、JERF2在非生物脅迫應(yīng)答中的功能分析[D]. 張執(zhí)金.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2004



本文編號(hào)：3530529