發(fā)布時(shí)間：2021-11-12 03:04

　　煙草花葉病毒（Tobacco mosaic virus,TMV）為正義單鏈RNA病毒,其結(jié)構(gòu)簡單,寄主廣泛,且穩(wěn)定性強(qiáng)。TMV以機(jī)械傳播為主,是威脅煙草等多種茄科作物的重要病原之一。RBP（RNA-binding proteins）是真核生物中廣泛存在的一類蛋白,在植物應(yīng)對(duì)生物脅迫與非生物脅迫中發(fā)揮重要作用,特別是參與植物調(diào)控RNA病毒侵染途徑。本論文以普通煙草內(nèi)源基因NtRBP45為研究對(duì)象,初步探索了其在寄主應(yīng)答TMV侵染過程中可能的作用機(jī)制,獲得主要結(jié)果如下:（1）TMV侵染珊西煙引發(fā)NtRBP45上調(diào)表達(dá)利用RT-qPCR分析TMV侵染珊西煙中NtRBP45的轉(zhuǎn)錄表達(dá),結(jié)果顯示NtRBP45轉(zhuǎn)錄水平在接種TMV后顯著上升,在3 d時(shí)達(dá)峰值,表明TMV侵染普通煙草后引發(fā)NtRBP45的上調(diào)表達(dá)。因而,推測(cè)NtRBP45表達(dá)量升高可能有助于煙草抵御TMV侵染。（2）NtRBP45主要定位于細(xì)胞核構(gòu)建植物表達(dá)載體pNtRBP45-GFP、pNtRBP45N^△-GFP、pNtRBP45C^△-GFP、pNtRBP45N^△C... 

【文章來源】：塔里木大學(xué)新疆維吾爾自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：82 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

TMV基因組結(jié)構(gòu)示意

塔里木大學(xué)碩士學(xué)位論文第1章文獻(xiàn)綜述9圖1-3RBPs在轉(zhuǎn)錄后基因表達(dá)調(diào)控中的作用（Glisovic，2008）[84]Fig.1-3ThefunctionofRBPsintheregulationofpost-transcriptionalgeneexpression科學(xué)家利用擬南芥開展了大量的關(guān)于RBPs應(yīng)答非生物脅迫的研究。擬南芥的RBPs中的AtGRP2和AtGRP7能夠在低溫下促進(jìn)種子發(fā)芽和幼苗生長，提高擬南芥的抗寒性[94]。另有研究顯示在干旱或脫落酸脅迫下擬南芥的GR-RBP（AtGRP）基因的表達(dá)量反而會(huì)下降[95]。Kim等人研究了水稻OsGRPs蛋白，發(fā)現(xiàn)OsGRP1、OsGRP4和OsGRP6同樣具有提高水稻抗寒性的功能[94]。擬南芥中的兩種RNA解旋酶AtRH9和AtRH25在鹽脅迫下過表達(dá)會(huì)延遲種子的萌發(fā)時(shí)間，說明AtRH9和AtRH25對(duì)鹽脅迫具有負(fù)調(diào)控作用[96]。植物通常會(huì)經(jīng)受超過最適溫度5℃或更高的溫度，但在高溫下會(huì)影響植物正常的細(xì)胞過程，并且會(huì)降低植物的生長和延遲發(fā)育[97]。相應(yīng)的植物也進(jìn)化應(yīng)對(duì)熱脅迫的相應(yīng)機(jī)制。例如，擬南芥有21種熱休克反應(yīng)因子（Heatshocktranscriptionfactors,HSFs)，其中HsfA1a和HsfA1b能夠?qū)崦{迫及時(shí)作出反應(yīng)，HsfA2能夠延長植物對(duì)高溫的耐受時(shí)間，HsfA3對(duì)植物的耐熱性也具有一定作用[98]。此外，Guan等人[97]的研究顯示含有KH域RNA結(jié)合蛋白R(shí)CF3是擬南芥中熱應(yīng)激反應(yīng)基因表達(dá)和耐熱性的重要的調(diào)節(jié)因子。植物在病原侵染條件下可激活其防御系統(tǒng)，表達(dá)多種防衛(wèi)反應(yīng)相關(guān)蛋白，如病程相

塔里木大學(xué)碩士學(xué)位論文第2章TMV侵染普通煙草對(duì)NtRBP45表達(dá)影響分析19反應(yīng)程序：95℃2minHoldstage95℃15s55℃30sCyclingStage40個(gè)循環(huán)72℃30s95℃15s60℃1minMeltCurvestage95℃15s2.3結(jié)果與分析2.3.1不同時(shí)間段煙草總RNA提取運(yùn)用QIAGEN公司植物總RNA試劑盒提取TMV侵染后不同時(shí)間段煙草總RNA（圖2-1）。獲得煙草總RNA，經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)得到較完整的RNA條帶，依次為28sRNA、18sRNA和5sRNA，可以用于下步實(shí)驗(yàn)。圖2-1煙草總RNA提取Fig.2-1TobaccototalRNAextraction2.3.2NtRBP45在TMV侵染煙草中的轉(zhuǎn)錄表達(dá)分析以NtActin為內(nèi)參基因，未接種TMV的煙草（0d）為對(duì)照，取TMV侵染1d、2d、3d和4d的接種葉片進(jìn)行RT-qPCR，分析NtRBP45表達(dá)水平。結(jié)果如圖2-2所示，接種TMV后NtRBP45的表達(dá)量顯著升高，2d后達(dá)到極顯著水平。其中在1-2d之間NtRBP45表達(dá)量升高幅度較小，2-3d之間相對(duì)表達(dá)量升高幅度較大，達(dá)到3.7倍。NtRBP45表達(dá)量在3d達(dá)到峰值，總體呈先上升后下降。

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本文編號(hào)：3490037