發(fā)布時(shí)間：2021-10-12 05:53

　　油茶是中國(guó)重點(diǎn)發(fā)展的木本油料作物,海南島是中國(guó)油茶資源分布最南緣地區(qū),資源和產(chǎn)業(yè)發(fā)展特色明顯。由于海南島油茶資源研究與開發(fā)利用起步晚,國(guó)內(nèi)外對(duì)該資源的系統(tǒng)評(píng)價(jià)尚未開展,關(guān)于海南島油茶資源的分類問題仍無(wú)定論,這對(duì)海南島特異油茶資源的保護(hù)與創(chuàng)新利用、海南特色油茶產(chǎn)業(yè)發(fā)展極為不利。同時(shí),油茶組物種的分類和歸并問題存在較大的分歧。此外,對(duì)包括海南島油茶資源在內(nèi)的國(guó)內(nèi)越南油茶資源進(jìn)行評(píng)價(jià),以進(jìn)一步明確海南島油茶的資源特色,了解海南島油茶資源的遺傳多樣性水平和遺傳結(jié)構(gòu),為相關(guān)資源的創(chuàng)新利用和保護(hù)提供科學(xué)依據(jù)。因此,本研究對(duì)42個(gè)居群共867份油茶種質(zhì)資源材料進(jìn)行分子分析,基于ISSR和SRAP標(biāo)記技術(shù),分析山茶屬油茶組普通油茶、越南油茶、小果油茶、高州油茶、陸川油茶,以及香花油茶的分類地位與親緣關(guān)系,并對(duì)海南島油茶種質(zhì)資源資源進(jìn)行分類鑒定;同時(shí),基于SRAP標(biāo)記評(píng)價(jià)海南島油茶資源和中國(guó)越南油茶資源的遺傳多樣性,分析居群間的遺傳結(jié)構(gòu)和分化。主要研究結(jié)果如下:（1）以海南島油茶基因組DNA為模板,采用單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)相結(jié)合方法,建立海南島油茶SRAP-PCR最優(yōu)體系,即在20μL體系中包含:10×... 

【文章來(lái)源】：海南大學(xué)海南省 211工程院校

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

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DNA瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)Fig.2-1AgarosegelelectrophoresisofgemomicDNA

海南大學(xué)碩士學(xué)位論文21圖2-1DNA瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)Fig.2-1AgarosegelelectrophoresisofgemomicDNA2.2.2海南島油茶SRAP-PCR單因素試驗(yàn)（1）模板DNA用量對(duì)SRAP-PCR擴(kuò)增PCR反應(yīng)中模板DNA用量是關(guān)鍵因素之一。不同用量DNA模板對(duì)海南島油茶SRAP-PCR反應(yīng)體系影響不大，本研究設(shè)置DNA用量梯度范圍內(nèi)均能擴(kuò)增獲得條帶，且清晰度和背景深度差異較小（圖2-2）。當(dāng)模板DNA濃度大于60ng時(shí)，條帶數(shù)量少且清晰度略低；當(dāng)模板DNA濃度5~60ng時(shí)，條帶清晰，帶型保持一致。正交試驗(yàn)選用5~60ng模板DNA用量梯度水平。圖2-2DNA模板用量和dNTPs濃度對(duì)SRAP-PCR反應(yīng)體系的影響Fig.2-2EffectofconcentrationoftemplateDNAanddNTPsonSRAP-PCRreactionsystem注:M:100bpDNAMarker;1~10:1ng,5ng,20ng,40ng,60ng,80ng,100ng,120ng,160ng,200ng;11~20:0.025mmol/L,0.05mmol/L,0.1mmol/L,0.15mmol/L,0.2mmol/L,0.25mmol/L,0.375mmol/L,0.5mmol/L,0.75mmol/L,1.0mmol/LNote:M:100bpDNAMarker;1~10:1ng,5ng,20ng,40ng,60ng,80ng,100ng,120ng,160ng,200ng;11~20:0.025mmol/L,0.05mmol/L,0.1mmol/L,0.15mmol/L,0.2mmol/L,0.25mmol/L,0.375mmol/L,0.5mmol/L,0.75mmol/L,1.0mmol/L（2）dNTPs濃度對(duì)SRAP-PCR擴(kuò)增PCR反應(yīng)中dNTPs濃度影響擴(kuò)增反應(yīng)效率，濃度過(guò)低效率降低，條帶數(shù)量減少、

跎伲?邐?紉菜嬤?檔停?踔廖薹ü鄄斕�。因此�??皇匝檠≡?.05~0.20mmol/LdNTPs濃度梯度水平。（3）TaqDNA聚合酶用量對(duì)SRAP-PCR擴(kuò)增TaqDNA聚合酶用量對(duì)PCR反應(yīng)的最終結(jié)果影響重大，過(guò)低濃度的TaqDNA聚合酶會(huì)導(dǎo)致產(chǎn)物數(shù)量減少，甚至無(wú)法擴(kuò)增，而高濃度的聚合酶又會(huì)導(dǎo)致非特異性擴(kuò)增。當(dāng)TaqDNA聚合酶濃度為1U以下時(shí)，條帶數(shù)量少且不清晰；TaqDNA聚合酶濃度為1U以上時(shí)，TaqDNA聚合酶濃度和產(chǎn)物擴(kuò)增數(shù)量呈正相關(guān)；當(dāng)TaqDNA聚合酶濃度為5U時(shí)，泳道10條帶模糊(圖2-3)。故正交試驗(yàn)選擇1.5~4.0U的TaqDNA聚合酶濃度梯度水平。圖2-3Taq酶濃度和和引物濃度對(duì)SRAP-PCR反應(yīng)體系的影響Fig.2-3EffectofTaqDNApolymeraseandprimerconcentrationonSRAP-PCRreactionsystem注:M:100bpDNAMarker;1~10:0.05U,0.25U,0.5U,0.75U,1U,1.5U,2.0U,3.0U,4.0U,5.0U;11~20:0.025μmol/L,0.05μmol/L,0.1μmol/L,0.2μmol/L,0.4μmol/L,0.5μmol/L,0.6μmol/L,0.7μmol/L,0.9μmol/L,1.2μmol/LNote:M:100bpDNAMarker;1~10:0.05U,0.25U,0.5U,0.75U,1U,1.5U,2.0U,3.0U,4.0U,5.0U;11~20:0.025μmol/L,0.05μmol/L,0.1μmol/L,0.2μmol/L,0.4μmol/L,0.5μmol/L,0.6μmol/L,0.7μmol/L,0.9μmol/L,1.2μmol/L（4）引物濃度對(duì)SRAP-PCR擴(kuò)增引物濃度處于0.20~0.60μmol/L時(shí)，泳道14至泳道17的條帶清晰、穩(wěn)定，帶型一致；引物濃度低于0.20μmol/L時(shí)，泳道11至泳道13條帶數(shù)量較少且不清晰；當(dāng)引物濃度高于0.60μmol/L時(shí)，泳道18至泳道20擴(kuò)增出的條帶數(shù)量開始減少，清晰度也隨之減弱(圖2-3)。因此，本研究正交試驗(yàn)選擇0.20~0.60μmol/L的引物濃度梯

【參考文獻(xiàn)】：
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本文編號(hào)：3432011