Torque teno virus（TTV）是日本科學(xué)家Nishizawa等在1997年運用代表性差異分析（Representational difference analysis,RDA）技術(shù)從不明原因的輸血后肝炎患者血清中發(fā)現(xiàn)的一種新的環(huán)狀單鏈DNA病毒,又名輸血傳播病毒、細(xì)環(huán)病毒。國內(nèi)外學(xué)者先后在世界各地進(jìn)行了不同動物源的TTV流行病學(xué)調(diào)查及病原學(xué)研究,發(fā)現(xiàn)TTV1和TTV2是仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征的潛在致病病毒,ORF1可能編碼該病毒的核衣殼蛋白。目前國內(nèi)外通常采用PCR方法檢測該病毒,該方法雖具有準(zhǔn)確性高的優(yōu)點,但難以快速廣泛應(yīng)用于各養(yǎng)殖場。血清ELISA的檢測方法可以快速批量進(jìn)行動物疾病的流行病調(diào)查。因此,本研究通過巢式PCR方法擴(kuò)增獲得豬TTV1-ORF1和TTV2-ORF1全長基因,分別克隆至克隆載體p EASY-T1,驗證正確后,利用生物信息學(xué)軟件及在線分析軟件對測序結(jié)果進(jìn)行生物信息學(xué)分析,將驗證正確的豬TTV1-ORF1-XJ和TTV2-ORF1-XJ亞克隆至表達(dá)載體p EASY-E1,使用工程菌菌株Transetta（DE3）、菌株BL21（DE）,Trans1-T... 

【文章來源】：石河子大學(xué)新疆維吾爾自治區(qū) 211工程院校

【文章頁數(shù)】：74 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英語字母縮寫和中英文全稱對照表
前言
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1研究進(jìn)展
        1.1.1 TTV的結(jié)構(gòu)與基因組成
        1.1.2 TTV的蛋白質(zhì)
        1.1.3 TTV的種類
        1.1.4 TTV的復(fù)制機(jī)制
    1.2流行分布
        1.2.1 流行范圍
        1.2.2 傳播途徑
    1.3致病機(jī)理
        1.3.1 TTV的靶器官及靶細(xì)胞
        1.3.2 TTV的共生性
        1.3.3 TTV的潛在致病性
        1.3.4 TTV與免疫
    1.4 TTV檢測方法的標(biāo)準(zhǔn)化
    1.5 研究趨勢
        1.5.1 TTV作為潛在的水質(zhì)監(jiān)測指標(biāo)
        1.5.2 TTV作為潛在的藥物載體
        1.5.3 豬TTV作為豬源產(chǎn)品加工過程的檢測指標(biāo)
        1.5.4 豬TTV的間接ELISA檢測試劑盒及基因工程疫苗的開發(fā)
第二章 豬TTV1-ORF1-XJ、TTV2-ORF1-XJ基因的克隆
    2.1 材料
        2.1.1 樣本
        2.1.2 試劑和器材
    2.2 方法
        2.2.1檢測引物設(shè)計
        2.2.2 目的基因擴(kuò)增引物設(shè)計
        2.2.3 總DNA的提取
        2.2.4 目的片段的擴(kuò)增
        2.2.5 回收純化DNA片段
        2.2.6 目的基因的克隆
        2.2.7 轉(zhuǎn)化
        2.2.8 質(zhì)粒提取
        2.2.9 PCR鑒定克隆產(chǎn)物
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 樣品的PCR檢測結(jié)果
        2.3.2 巢式PCR法擴(kuò)增TTV1-ORF1-XJ和TTV2-ORF1-XJ基因的結(jié)果
        2.3.3豬源TTV1-ORF1-XJ和TTV2-ORF1-XJ基因的克隆
        2.3.4 重組克隆載體測序結(jié)果
        2.3.5 BLAST比對結(jié)果
    2.4 討論
第三章 豬TTV-ORF1生物信息學(xué)分析
    3.1 主要方法
    3.2結(jié)果
        3.2.1 同源性比對
        3.2.2預(yù)測翻譯蛋白
        3.2.3 預(yù)測蛋白理化性質(zhì)
        3.2.4 蛋白結(jié)構(gòu)預(yù)測分析
        3.2.5 二級結(jié)構(gòu)預(yù)測
    3.3 討論
        3.3.1 同源性
        3.3.2 預(yù)測翻譯蛋白
        3.3.3 預(yù)測蛋白理化性質(zhì)
        3.3.4 蛋白結(jié)構(gòu)預(yù)測分析
        3.3.5 二級結(jié)構(gòu)預(yù)測
第四章 TTV-ORF1重組表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建與鑒定
    4.1 材料與主要試劑
        4.1.1樣本
        4.1.2 主要試劑
    4.2 方法
        4.2.1 目的基因與表達(dá)載體的連接
        4.2.2 轉(zhuǎn)化
        4.2.3 PCR鑒定后提取質(zhì)粒
        4.2.4 PCR鑒定結(jié)果
    4.3 結(jié)果
        4.3.1 重組表達(dá)載體鑒定鑒定結(jié)果
    4.4 討論
第五章 豬TTV1-ORF1-XJ和TTV2-ORF1-XJ基因的原核表達(dá)
    5.1 材料與試劑
        5.1.1 菌株
        5.1.2 SDS提取DNA時所用的“SDS提取緩沖液”
        5.1.3 Western Blot試劑配制
    5.2 主要方法
        5.2.1 SDS-PAGE操作方法
        5.2.2重組蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)
        5.2.3 表達(dá)條件的篩選
            5.2.3.1 誘導(dǎo)時間的篩選
            5.2.3.2 誘導(dǎo)溫度的篩選
            5.2.3.3 IPTG誘導(dǎo)濃度的篩選
        5.2.4 表達(dá)感受態(tài)選擇
        5.2.5 重組蛋白的可溶性檢測
        5.2.6 Western Blot檢測
    5.3結(jié)果
        5.3.1 相同溫度不同濃度下誘導(dǎo)結(jié)果
        5.3.2 相同濃度不同溫度誘導(dǎo)結(jié)果
        5.3.3 Western Blot檢測誘導(dǎo)結(jié)果
    5.4 討論
全文總結(jié)
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡介
石河子大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]新疆北疆地區(qū)豬Torque teno病毒的PCR檢測和序列分析[J]. 施研進(jìn),王禮偉,屈勇剛,石家成,楊媛.  中國人獸共患病學(xué)報. 2014(03)
[2]豬TTV2 ORF1基因的原核表達(dá)及多克隆抗體的制備[J]. 張文文,王小敏,肖琦,周忠濤,汪偉,溫立斌,李彬,郭容利,張雪寒,周俊明,倪艷秀,呂立新,俞正玉,茅愛華,胡屹屹,劉永杰,何孔旺.  江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報. 2014(01)
[3]豬輸血傳播病毒2型ORF1基因的原核表達(dá)及條件優(yōu)化[J]. 王小敏,何孔旺,張文文,王東田,周忠濤,張雪寒,周俊明,汪偉,倪艷秀,溫立斌.  華北農(nóng)學(xué)報. 2013(05)
[4]華南地區(qū)豬輸血傳播病毒流行病學(xué)調(diào)查與分析[J]. 南文金,婁高明,黃健強(qiáng),馮順勝.  河南農(nóng)業(yè)科學(xué). 2011(12)
[5]2009年我國部分豬群輸血傳播病毒感染情況調(diào)查[J]. 訾占超,夏應(yīng)菊,韓雪,汪葆玥,遇秀玲,翟新驗,田克恭,倪建強(qiáng).  中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報. 2011(10)
[6]我國豬群中TTV的鑒定及其分子流行病學(xué)分析[J]. 王礞礞,周艷君,陳宗艷,于海,李國新,閻麗萍,姜一峰,侯軍委,童光志.  中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報. 2009(10)
[7]TTV病毒ORF1抗原的基因克隆及原核表達(dá)[J]. 李一冬,唐琳,丁力,趙新合,趙國強(qiáng).  河南職工醫(yī)學(xué)院學(xué)報. 2005(06)



本文編號：3426322