本文關(guān)鍵詞：副豬嗜血桿菌耐藥性調(diào)查及其對氟苯尼考耐藥分子機制的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：副豬嗜血桿菌是一種革蘭氏陰性桿菌,易引起豬的多發(fā)性漿膜炎、腦膜炎、關(guān)節(jié)炎等疾病。副豬嗜血桿菌是條件致病菌,經(jīng)常繼發(fā)感染于一些病毒性疾病如豬偽狂犬病、豬流感、豬瘟,另外,還會與諸如豬繁殖與呼吸綜合征、豬圓環(huán)病毒病等免疫抑制性疾病發(fā)生混合感染,極大損害了一線養(yǎng)殖業(yè)的經(jīng)濟效益。目前該病的防治主要依靠抗菌藥治療,但由于抗菌藥長期盲目地使用,使得副豬嗜血桿菌對臨床常用抗菌藥產(chǎn)生不同程度的耐藥,耐藥菌株的盛行給該病的治療帶來了極大挑戰(zhàn)。因此,臨床上對其藥物敏感性進行長期監(jiān)控成為防治的關(guān)鍵,對其耐藥機制進行研究也為控制耐藥性的擴散提供理論支持。本研究旨在調(diào)查我國上海地區(qū)副豬嗜血桿菌對臨床常用抗菌藥的耐藥情況,為該病的臨床用藥與防治提供數(shù)據(jù)支持。試驗共采集484個樣品,分離鑒定出62株副豬嗜血桿菌。采用微量瓊脂稀釋法測定21種臨床常用抗菌藥的最小抑菌濃度。藥物敏感性測定結(jié)果表明,所有菌株都對阿奇霉素、替米考星、泰妙菌素、阿米卡星、頭孢噻呋和左氧氟沙星敏感,其中90%以上菌株對紅霉素(60,96.8%)、氟苯尼考(59,95.3%)、氯霉素(60,96.8%)、慶大霉素(60,96.8%)、壯觀霉素(61,98.4%)、青霉素(57,91.9%)、氨芐青霉素(57,91.9%)和環(huán)丙沙星(61,98.4%)敏感。對四環(huán)素和恩諾沙星耐藥率較高,分別為75.8%和30.6%。耐藥譜分析顯示,主要耐藥譜型有17種,9.7%的菌株對三種以上的抗菌藥耐受,37.1%的菌株對兩種以上的抗菌藥耐受。最多同時耐5種藥物,但耐藥菌株比例較低(1,1.5%)。本研究首次發(fā)現(xiàn)了3株呈現(xiàn)氟苯尼考耐藥的副豬嗜血桿菌,對耐藥菌株進行氟苯尼考耐藥基因檢測,發(fā)現(xiàn)三株菌均攜帶外排泵基因flo R,其核苷酸序列全長為1215bp,與已報道的floR長度一致。其氨基酸序列與已經(jīng)報道的大腸桿菌內(nèi)氟苯尼考抗性基因floR(GenBank登錄號:NC_012692)的氨基酸序列同源性高達97%。通過質(zhì)粒提取、大片段電泳以及Southern Blot試驗發(fā)現(xiàn),三株氟苯尼考耐藥菌株中floR基因均定位于大小約為6kb的質(zhì)粒上,而并非基因組上。利用Primer Walking對上述質(zhì)粒全序列進行測定,發(fā)現(xiàn)三株耐藥菌中的攜帶floR的質(zhì)粒大小和序列完全一致,為同一質(zhì)粒,命名其為pHPSF1。生物信息學(xué)分析表明該質(zhì)粒有5個開放閱讀框,包括質(zhì)粒轉(zhuǎn)移及復(fù)制相關(guān)基因(mobA/L、mobC和rep)、氟苯尼考耐藥基因flo R以及轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子lysR。序列比對及分析顯示,質(zhì)粒pHPSF1與多個來源于動物病原菌的耐藥質(zhì)粒同源性較高,提示這些質(zhì)粒之間在抗菌藥物的選擇性壓力下可發(fā)生重組并進化為新型的耐藥質(zhì)粒。本研究結(jié)果顯示上海地區(qū)的副豬嗜血桿菌對臨床常用抗菌藥物耐藥總體狀況尚不嚴重,但鑒于多個臨床常用藥物(如氟苯尼考)的耐藥菌株已經(jīng)出現(xiàn),應(yīng)對其耐藥性進行長期監(jiān)測,對耐藥菌株的分子傳播機制進行深入研究,以便更有效地對耐藥菌株的大規(guī)模流行進行防控,保障養(yǎng)殖業(yè)的經(jīng)濟效益。
【關(guān)鍵詞】：副豬嗜血桿菌 耐藥性 氟苯尼考 耐藥機制 Southern Blot
【學(xué)位授予單位】：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S852.61
【目錄】：

• 摘要6-7
• 英文摘要7-14
• 英文縮略表14-16
• 第一章 引言16-20
• 1.1 副豬嗜血桿菌病的研究進展16-18
• 1.1.1 副豬嗜血桿菌介紹16-17
• 1.1.2 臨床癥狀和病理變化17
• 1.1.3 副豬嗜血桿菌病的診斷17
• 1.1.4 副豬嗜血桿菌病的防治措施17-18
• 1.2 細菌耐藥性研究進展18-20
• 1.2.1 細菌耐藥性產(chǎn)生機理18
• 1.2.2 多重耐藥性機理18-20
• 第二章 副豬嗜血桿菌的分離與鑒定20-26
• 2.1 實驗材料20-22
• 2.1.1 樣本來源20
• 2.1.2 樣本菌株20
• 2.1.3 主要試劑與試劑盒20
• 2.1.4 主要培養(yǎng)基及其配制20-21
• 2.1.5 常用緩沖液及其他試劑的配制21
• 2.1.6 主要儀器設(shè)備21-22
• 2.2 實驗方法22-23
• 2.2.1 樣本菌株的采集與分離22
• 2.2.2 副豬嗜血桿菌的鑒定與保存22-23
• 2.3 實驗結(jié)果23-25
• 2.3.1 副豬嗜血桿菌的形態(tài)特征23
• 2.3.2 PCR鑒定與菌株測序23-24
• 2.3.3 副豬嗜血桿菌的分離情況24-25
• 2.4 討論25-26
• 2.4.1 副豬嗜血桿菌的分離情況25-26
• 第三章 副豬嗜血桿菌的耐藥性調(diào)查26-35
• 3.1 實驗材料26-28
• 3.1.1 試驗菌株26
• 3.1.2 質(zhì)控菌株26
• 3.1.3 主要藥品與試劑26-27
• 3.1.4 主要培養(yǎng)基及其配制27
• 3.1.5 常用抗生素標準品及工作母液配制27-28
• 3.1.6 常用緩沖液及其他試劑的配制28
• 3.1.7 主要儀器設(shè)備28
• 3.2 實驗方法28-30
• 3.2.1 試驗菌株與質(zhì)控菌株的復(fù)壯28-29
• 3.2.2 含藥瓊脂平板的制備29
• 3.2.3 微量瓊脂稀釋法測試藥物敏感性29-30
• 3.2.4 結(jié)果判斷30
• 3.3 實驗結(jié)果30-34
• 3.3.1 副豬嗜血桿菌耐藥性30
• 3.3.2 多重耐藥性與耐藥譜30-34
• 3.4 討論34-35
• 第四章 副豬嗜血桿菌對氟苯尼考耐藥分子機制的研究35-52
• 4.1 實驗材料35-37
• 4.1.1 試驗菌株35
• 4.1.2 主要試劑與試劑盒35-36
• 4.1.3 主要培養(yǎng)基及其配制36
• 4.1.4 常用緩沖液及其他試劑的配制36-37
• 4.1.5 主要儀器設(shè)備37
• 4.2 實驗方法37-45
• 4.2.1 氟苯尼考耐藥基因floR的檢測37-40
• 4.2.2 氟苯尼考耐藥基因floR的定位40-42
• 4.2.3 質(zhì)粒的酶切、測序、分析及注釋42-44
• 4.2.4 質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化與鑒定44-45
• 4.3 實驗結(jié)果45-50
• 4.3.1 耐藥基因floR的鑒定結(jié)果與序列分析45-46
• 4.3.2 攜帶floR基因副豬嗜血桿菌的基因定位46
• 4.3.3 質(zhì)粒的酶切與測序46-48
• 4.3.4 質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化與鑒定48
• 4.3.5 質(zhì)粒序列分析及注釋48-50
• 4.4 討論50-52
• 4.4.1 氟苯尼考耐藥性與耐藥基因的關(guān)系探究50-51
• 4.4.2 質(zhì)粒的測序與分析51-52
• 第五章 全文結(jié)論52-53
• 參考文獻53-57
• 附錄57-60
• 致謝60-61
• 作者簡歷61

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 胡軍勇;湯細彪;湯電;劉望宏;倪德斌;吳斌;;臨床分離豬鏈球菌和副豬嗜血桿菌多重耐藥性監(jiān)測[J];華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報;2012年05期

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 張巖;石河子墾區(qū)副豬嗜血桿菌病的流行病學(xué)調(diào)查研究[D];石河子大學(xué);2013年

  本文關(guān)鍵詞：副豬嗜血桿菌耐藥性調(diào)查及其對氟苯尼考耐藥分子機制的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：340782