鐵皮石斛,蘭科石斛蘭屬多年生草本植物�，F(xiàn)代藥理學(xué)研究證明其成分具有多種功效,在食用、藥用等方面都體現(xiàn)出一定的價(jià)值。但鐵皮石斛對(duì)生長(zhǎng)環(huán)境和氣候條件要求十分苛刻,且生長(zhǎng)發(fā)育緩慢,野生資源十分稀缺。20世紀(jì)90年代,浙江省在全國(guó)率先開(kāi)始鐵皮石斛的規(guī)�；N植和產(chǎn)業(yè)化開(kāi)發(fā),目前已是鐵皮石斛種植與深加工產(chǎn)業(yè)的主要分布地。然而,鐵皮石斛的人工栽培往往是大棚設(shè)施栽培且高密度栽培,棚內(nèi)濕度大、通風(fēng)不良、相對(duì)悶熱,非常利于病害的發(fā)生,浙江省又地處亞熱帶,夏季高溫高濕,梅雨季持續(xù)時(shí)間久,導(dǎo)致病害的發(fā)生更加持久、普遍。為明確浙江省幾種常見(jiàn)的鐵皮石斛病害的病原物,以及篩選出適合鐵皮石斛生長(zhǎng)的綠色防控措施和高效低毒低殘留的化學(xué)應(yīng)急技術(shù),本文進(jìn)行了一些初步的研究探索。主要研究結(jié)果如下:（1）通過(guò)對(duì)鐵皮石斛種植基地的病害發(fā)生規(guī)律調(diào)查,病害典型癥狀樣本的采集、病原菌的分離、純化、致病性測(cè)定、形態(tài)觀察、rDNA-ITS序列分析等,明確引起鐵皮石斛白絹病的病原菌為齊整小核菌Sclerotium rolfsii,該病發(fā)生高峰期為高溫高濕的梅雨季節(jié)或夏、秋高溫季節(jié);明確引起鐵皮石斛輪紋病的病原菌為露濕漆斑菌Myrotheciu... 

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

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設(shè)施栽培鐵皮石斛不同栽培方式

浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文鐵皮石斛白絹病的病原物鑒定及防控措施1912d左右可見(jiàn)淡黃色油菜籽狀菌核，不均勻地分布在培養(yǎng)基表面，30d后變?yōu)辄S褐色（圖2.2-e）。在菌核形成過(guò)程中，培養(yǎng)基上產(chǎn)生大量水珠，后期減少。此形態(tài)指標(biāo)與齊整小核菌Sclerotiumrolfsii一致。圖2.2鐵皮石斛白絹病田間發(fā)病癥狀、致病性測(cè)定結(jié)果及病原菌特征Fig.2.2ThesymptomsofDendrobiumofficinalesouthernblight,resultsofpathogenicityandmorphologicalcharactersofSclerotiumrolfsiia～b：田間發(fā)病癥狀；c：致病性測(cè)定結(jié)果；d：在PDA上5d大小的菌落；e：在PDA上30d大小的菌落a～b：thesymptomsinthefield；c：resultsofpathogenicity；d：5doldcolonyonPDA；e：30doldcolonyandsclerotiaonPDA2.2.4病原菌的分子鑒定以分離菌株SR1的基因組DNA為模板，用ITS通用引物ITS1和ITS4進(jìn)行PCR擴(kuò)增，得到約650bp的PCR產(chǎn)物，PCR產(chǎn)物測(cè)序結(jié)果用BLAST軟件在GenBank中進(jìn)行同源性比對(duì)（登錄號(hào)為KU854983）。比對(duì)結(jié)果表明株菌與齊整

浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文鐵皮石斛輪紋病的病原物鑒定及防控措施31圖3.1鐵皮石斛輪紋病田間發(fā)病癥狀、致病性測(cè)定結(jié)果及病原菌特征Fig.3.1ThesymptomsofDendrobiumofficinaleringrot,resultsofpathogenicityandmorphologicalcharactersofMyrotheciumroriduma：田間發(fā)病癥狀；b：致病性測(cè)定結(jié)果；c：PDA上菌落正面；d：PDA上菌落背面；e：分生孢子梗；f：分生孢子a：thesymptomsinthefield；b：resultsofpathogenicity；c：topofthecolonyonPDA；d：bottomofthecolonyonPDA；e：sporodochia；f：conidiophore.3.2.4病原菌的分子生物學(xué)特征分別以分離菌株TPLW01、TPLW02、TPLW03、TPLW04和TPLW05的基因組DNA為模板，用ITS通用引物ITS1和ITS4進(jìn)行PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物電泳后在紫外透射儀中觀察可見(jiàn)各菌株分別擴(kuò)增出約600bp的PCR產(chǎn)物（圖3.2），PCR產(chǎn)物測(cè)序所得的rDNA-ITS序列提交至GenBank，獲得上述5株菌對(duì)應(yīng)的GenBank登錄號(hào)分別為MF939638、MF939639、MF939640、MF939641、MF939642。BLAST搜索和比對(duì)結(jié)果表明這5株菌與露濕漆斑菌（登錄號(hào)為KX421205.1）的同源相性為100.0%。通過(guò)系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)分析表明，鐵皮石斛輪紋病病原菌與露濕漆斑菌同源性最高，位于系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)的同一分支，支持率為66％(圖3.3)。進(jìn)一步證實(shí)了分離菌株TPLW01、TPLW02、TPLW03、TPLW04和TPLW05為露濕漆斑菌。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[2]我國(guó)鐵皮石斛產(chǎn)業(yè)發(fā)展研究[J]. 王楓,石紅青.  中國(guó)林業(yè)經(jīng)濟(jì). 2019(03)
[3]鐵皮石斛莖、葉、花中黃酮含量及其體外抗氧化活性研究[J]. 李芳,魏云,陳艷杰.  中醫(yī)學(xué)報(bào). 2019(05)
[4]一種無(wú)公害鐵皮石斛仿野生栽培方法[J]. 淦國(guó)英.  農(nóng)業(yè)與技術(shù). 2019(05)
[5]鐵皮石斛白絹病發(fā)生規(guī)律研究[J]. 陳秋燕,陳東紅,石艷,斯王肅,吳令上,斯金平.  中國(guó)中藥雜志. 2019(09)
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[7]浙江省中藥材2017年產(chǎn)銷形勢(shì)及發(fā)展對(duì)策[J]. 馬蕾,何伯偉,徐丹彬.  浙江農(nóng)業(yè)科學(xué). 2018(11)
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[9]鐵皮石斛加工制品研究現(xiàn)狀[J]. 胡秦佳寶,朱亞雄.  保鮮與加工. 2019(01)
[10]鐵皮石斛輪紋病病原菌鑒定及其防治藥劑篩選[J]. 沈偉東,趙玲琳,王國(guó)榮,邱春英,王翔,樓兵干.  植物保護(hù)學(xué)報(bào). 2018(04)

碩士論文
[1]鐵皮石斛栽培條件對(duì)品質(zhì)的影響及栽培技術(shù)規(guī)范研究[D]. 林文亮.集美大學(xué) 2019
[2]鐵皮石斛常見(jiàn)真菌病害的鑒定及復(fù)合菌劑的應(yīng)用研究[D]. 李夢(mèng)嬌.云南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017
[3]14種觀賞植物17種真菌病害的病原鑒定[D]. 王曉陽(yáng).華南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
[4]鐵皮石斛病原真菌分離與鑒定及印度梨形孢促生作用研究[D]. 曹星星.浙江大學(xué) 2015



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