本研究使用了轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)、RT-PCR擴(kuò)增技術(shù)以及透射電鏡觀察等實(shí)驗(yàn)技術(shù),對(duì)遼寧沈陽地區(qū)采集到的桃葉衛(wèi)矛黃斑駁葉片樣品和藜皺縮葉片樣品進(jìn)行分析。通過鑒定得出結(jié)論:桃葉衛(wèi)矛黃斑駁病癥伴隨的是這一癥狀的病毒是一種新病毒,該病毒屬于甲型線性病毒科（Alphaflexiviridae）馬鈴薯X病毒屬（Potexvirus）;藜葉片皺縮病癥伴隨的是豇豆花葉病毒科（Comovirinae）蠶豆病毒屬（Fabavirus）中的蠶豆萎蔫病毒2號(hào)（Broad Bean Wilt Virus 2,BBWV2）。本研究不僅發(fā)現(xiàn)了一種新的可以感染木本植物的病毒資源,擴(kuò)充了植物病毒資源庫,還進(jìn)一步豐富了已知病毒可侵染宿主的范圍,同時(shí)也部分奠定了植物病毒病防治的理論基礎(chǔ)。2018年7月,在遼寧沈陽地區(qū)采集到了表象癥狀為黃色斑駁的桃葉衛(wèi)矛疑似染病葉片。使用電子透鏡技術(shù)觀察到了大小約為500×13nm的線型病毒粒子。在后續(xù)實(shí)驗(yàn)中使用轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)與RT-PCR分子克隆技術(shù)在該樣品分離物中擴(kuò)增并得到一種Potexvirus屬病毒。完整的病毒基因組長度為6,784個(gè)核苷酸（不包括poly（A）尾巴）,其中包含5個(gè)開放閱... 

【文章來源】：沈陽大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 緒論
    1.1 植物病毒的研究概況
    1.2 植物病毒的鑒定方法
        1.2.1 生物學(xué)測(cè)定法
        1.2.2 電子顯微鏡技術(shù)
        1.2.3 酶聯(lián)免疫法
        1.2.4 分子生物學(xué)測(cè)定法
        1.2.5 第二代測(cè)序檢測(cè)法(NGS)
    1.3 桃葉衛(wèi)矛與藜植物與病毒病害簡(jiǎn)介
        1.3.1 桃葉衛(wèi)矛及其毒病
        1.3.2 藜及藜病毒病
    1.4 研究意義
    1.5 實(shí)驗(yàn)方案
第2章 桃葉衛(wèi)矛病毒病的分子鑒定與分析
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料及試劑
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.2 菌株及質(zhì)粒載體
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)使用試劑
        2.1.4 主要實(shí)驗(yàn)設(shè)備
    2.2 測(cè)序與設(shè)計(jì)引物
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 病毒電鏡觀察
        2.3.2 植物病毒總RNA的提取
        2.3.3 桃葉衛(wèi)矛上病毒的RT-PCR檢測(cè)
        2.3.4 PCR產(chǎn)物純化及回收
        2.3.5 DNA分子克隆
        2.3.6 重組質(zhì)粒的提取及鑒定
        2.3.7 序列分析
    2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
        2.4.1 桃葉衛(wèi)矛病葉樣品電鏡觀察結(jié)果
        2.4.2 RT-PCR檢測(cè)結(jié)果
        2.4.3 序列分析
    2.5 討論
第3章 藜病毒病的分子鑒定與分析
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料及菌株
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.2 感受態(tài)細(xì)胞及載體
        3.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑
        3.1.4 主要實(shí)驗(yàn)設(shè)備
    3.2 引物的設(shè)計(jì)與合成
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 TRIzol法提取植物總RNA
        3.3.2 藜上病毒的RT-PCR檢測(cè)
        3.3.3 PCR產(chǎn)物純化及回收
        3.3.4 DNA分子克隆
        3.3.5 重組質(zhì)粒的提取與鑒定
        3.3.6 序列分析
    3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
        3.4.1 RT-PCR檢測(cè)結(jié)果
        3.4.2 序列分析
    3.5 討論
第4章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
在學(xué)期間研究成果
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]蠶豆萎蔫病毒2號(hào)板藍(lán)根分離株全基因組序列測(cè)定與分析[J]. 王寶霞,齊永紅,辛敏,崔麗艷,王德富,牛顏冰.  中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào). 2019(03)
[2]蠶豆萎蔫病毒2號(hào)安徽分離物全基因組序列測(cè)定與分析[J]. 嚴(yán)丹侃,鄭紅英,張海珊,沈艷,顧江濤,章東方,燕飛.  植物保護(hù). 2018(01)
[3]藥用植物柴胡病毒病病原物的分子鑒定[J]. 寇麗莎,趙慧琪,王德富,郭尚,牛顏冰.  病毒學(xué)報(bào). 2017(04)
[4]太子參蕪菁花葉病毒和蠶豆萎蔫病毒的雙重RT-PCR檢測(cè)[J]. 匡云波,陳滿足,陸伊榮,陳晶,葉祖云.  園藝學(xué)報(bào). 2017(04)
[5]藜草花葉病毒的研究概述[J]. 馮黎霞,趙立榮,武目濤,于璇.  中國蔬菜. 2016(08)
[6]侵染白術(shù)的蠶豆萎蔫病毒2號(hào)的分子檢測(cè)與序列分析[J]. 牛顏冰,時(shí)曉麗,張西梅,趙慧琪,趙保佳.  病毒學(xué)報(bào). 2015(01)
[7]中國植物病毒研究40年[J]. 陳曉英,方榮祥.  微生物學(xué)通報(bào). 2014(03)
[8]蠶豆萎蔫病毒2號(hào)（BBWV2）基因組RNA2的序列測(cè)定[J]. 許新江.  新疆農(nóng)墾科技. 2013(12)
[9]侵染加工番茄的BBWV2的分子鑒定及田間檢測(cè)[J]. 張建云,許文博,劉升學(xué),黃家風(fēng).  石河子大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2013(06)
[10]影響桃葉衛(wèi)矛葉斑病病菌發(fā)生的環(huán)境條件[J]. 胡延生.  經(jīng)濟(jì)林研究. 2013(03)

博士論文
[1]小RNA深度測(cè)序在幾種木本植物病毒鑒定中的應(yīng)用[D]. 蘇秀.浙江大學(xué) 2015

碩士論文
[1]沈陽三種木本植物病毒病的分子檢測(cè)與鑒定[D]. 韓彤.沈陽大學(xué) 2018
[2]石河子加工辣椒病毒病的調(diào)查與研究[D]. 劉娟娟.石河子大學(xué) 2014
[3]番茄斑萎病毒屬的分子檢測(cè)技術(shù)研究[D]. 楊英華.江西農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
[4]四種檢疫性植物病毒的膠體金免疫層析試紙條的研究[D]. 張曉雷.安徽農(nóng)業(yè)大學(xué) 2009
[5]擬南芥MAG2基因在脅迫條件下對(duì)種子萌發(fā)及幼苗生長的影響[D]. 張波.蘭州大學(xué) 2009
[6]干種子中大豆花葉病毒（SMV）和菜豆普通花葉病毒（BCMV）的分子檢測(cè)技術(shù)研究[D]. 王杰.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2005
[7]幾種林木病毒鑒定與林業(yè)微生物菌種數(shù)據(jù)庫查詢系統(tǒng)構(gòu)建[D]. 黃金光.中國農(nóng)業(yè)大學(xué) 2004



本文編號(hào)：3330303