小麥葉銹病是由小麥葉銹菌（Puccinia triticina）侵染引起的一種真菌病害,對(duì)小麥生產(chǎn)危害嚴(yán)重。小麥葉銹菌屬于活體營(yíng)養(yǎng)型真菌,在小麥與葉銹菌互作的不親和組合中,小麥以過敏性反應(yīng)（Hypersentive reaction,HR）的方式對(duì)葉銹菌的侵染進(jìn)行抵抗。多胺（Polyamines,PAs）是普遍存在于生物體內(nèi)的一類生物代謝分子。近些年的研究發(fā)現(xiàn),多胺在植物生長(zhǎng)、發(fā)育及響應(yīng)脅迫等方面具有重要作用。實(shí)驗(yàn)室前期獲得了一個(gè)小麥與葉銹菌互作的轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫(kù),我們通過分析該庫(kù),篩選到多胺合成途徑中的關(guān)鍵酶基因TaADC在不親和組合及親和組合中的表達(dá)差異明顯。在此基礎(chǔ)上,本試驗(yàn)分別以小麥近等基因系TcLr26和其輪回親本Tc與葉銹菌生理小種260的互作體系為研究對(duì)象,探討TaADC在小麥抵抗葉銹菌侵染中的作用。所得主要試驗(yàn)結(jié)果如下:1.利用實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)檢測(cè)TaADC在小麥與葉銹菌互作過程中的表達(dá)特征。結(jié)果表明TaADC在不親和組合中被誘導(dǎo)表達(dá);而在親和組合中隨著侵染時(shí)間的延長(zhǎng),TaADC的表達(dá)量沒有明顯變化。2.構(gòu)建攜帶35S::TaADC-GFP重組質(zhì)粒的亞細(xì)胞定位載體,瞬時(shí)轉(zhuǎn)... 

【文章來源】：河北農(nóng)業(yè)大學(xué)河北省

【文章頁數(shù)】：50 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖２?ＴａＡＤＣ卞物信以學(xué)分析??注：Ａ：?ＴａＡＤＣ?？?ｌ＇丨保？、’ｊ：結(jié)構(gòu)域須測(cè)：Ｂ：?ＴａＡＤＣ系統(tǒng)發(fā)肖樹??Ｆｉｇ．２?Ｔａ?

?河北農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位（畢業(yè)）論文???焚光Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ?明場(chǎng)Ｂｒｉｇｈｔ?ｆｉｅｌｄ?疊加Ｍｅｒｇｅｄ??■關(guān)關(guān)???金，??■纘囉??圖６?ＴａＡＤＣ亞細(xì)胞定位觀察（標(biāo)尺＝２０?ｐｍ）??Ｆｉｇ．?６?Ｓｕｂｃｅｌｌｕｌａｒ?ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＴａＡＤＣ?（Ｂａｒ＝２０?＾ｍ）??３．４利用ＶＩＧＳ技術(shù)研究ｒｗｚｘ：的功能??３．４．１?構(gòu)建?ＢＳＭＶ：ｒａＡＤＣ?載體??本試驗(yàn)利用大麥條紋花葉病毒ＢＳＭＶ作為載體進(jìn)行Ｈ的基因的沉默。選取??的特異序列，設(shè)計(jì)引物，并在引物的兩端加上７ｖ〇？ｉ酶切位點(diǎn)，選取的片??段人小為２９１?ｂｐ。利用電泳檢測(cè)產(chǎn)物的正確性，如圖７，?的特異序列的位??置正確。因此回收目的片段并連接Ｔ載體后轉(zhuǎn)化大腸桿菌，挑選帶有７＾４／Ｘ：的??特異序列的陽性克隆送公司測(cè)序。??２０??

?精氨酸脫羧酶基因７ｂｙｌＰＣ在小麥抗葉銹菌中的功能分析???ｂｐ?Ｍ?１２??ＣＭ］：．：＇：．＇：：．，??：Ｆｆｌ??５００?Ｐ變碧麵Ｓ：?？?ｉ??：?１２９１ｂＰ??Ｗ??圖７?７？／ＪＤＣ沉默片段擴(kuò)增??注：Ｍ：?ＤＬ２０００?ＤＮＡＭａｒｋｅｒ；?１，２：?７＾ＤＣ?的?ＶＩＧＳ?片段；??Ｆｉｇ．?７?Ｓｉｌｅｎｃｅｄ?ＴａＡＤＣ?ｆｒａｇｍｅｎｔ?ｗａｓ?ａｍｐｌｉｆｉｅｄ??Ｎｏｔｅ：?Ｍ：?ＤＬ?２０００?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ；?１?，２：?ｔｈｅ?ＶＩＧＳ?ｆｒａｇｍｅｎｔ?ｏｆ?ＴａＡＤＣ??分別將測(cè)序正確的陽性質(zhì)粒和終載體ＰＳＬ０３８－１酶切，回收酶切過的片段并??把他們相連接，然后將成功連接的載體轉(zhuǎn)化至ＤＨ５ａ感受態(tài)細(xì)胞中。利用ｙＶｏ／１??進(jìn)行酶切，如圖８所示，并將該質(zhì)粒記作ＢＳＭＶ：?７＾１ＤＣ。??ｂｐ?Ｍ?１?２??２＿?ｉ?｜??１０００?Ｉ??７５０?Ｉ?Ｌ、??Ｍ）〇?２９１?ｂｐ??圖８酶切ＢＳＭＶ：?７＾ＤＣ質(zhì)粒??‘；Ｍ：?Ｍａｒｋｅｒ；?１．？陽性對(duì)照；２：?酶切產(chǎn)物；??Ｆｉｇ．８?ＢＳＭＶ：?ＴａＡＤＣ?ｐｌａｓｍｉｄ?ｗａｓ?ｄｉｇｅｓｔｅｄ??Ｎｏｔｅ：?Ｍａｒｋｅｒ；?１：?ｐｏｓｉｔｉｖｅ?ｃｏｎｔｒｏｌ；?２：?ｄｉｇｅｓｔｅｄ?ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ?ｏｆＢＳＭＶ：?ＴａＡＤＣ??２１??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[4]多胺代謝與玉米低溫脅迫的研究進(jìn)展[J]. 郝楠,王成,李月明.  園藝與種苗. 2018(08)
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[10]棉花精氨酸脫羧酶基因GhADC1克隆與表達(dá)分析[J]. 李亞棟,默輝娟,王省芬,孫艷香,馬峙英.  棉花學(xué)報(bào). 2013(04)

博士論文
[1]自噬在小麥?zhǔn)苋~銹菌侵染誘發(fā)的過敏性細(xì)胞死亡中的作用[D]. 劉剛.河北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015
[2]枳精氨酸脫羧酶基因PtADC抗逆功能解析及其調(diào)控因子分離與鑒定[D]. 孫培培.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014

碩士論文
[1]小麥抗葉銹防衛(wèi)反應(yīng)相關(guān)基因TaNRH的克隆與功能分析[D]. 李楠楠.河北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2019
[2]腐胺和水楊酸在緩解番茄和擬南芥幼苗低溫脅迫中的作用[D]. 王川泰.沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
[3]棉花多胺氧化酶GhPAOs基因的克隆及初步功能分析[D]. 成新琪.石河子大學(xué) 2016
[4]甘藍(lán)型油菜精氨酸脫羧酶基因的克隆及原核表達(dá)[D]. 洪林.西南大學(xué) 2011



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