花青素是自然界中廣泛存在于植物中的一類水溶性天然色素,屬于類黃酮化合物。研究顯示花青素的生物合成途徑基因主要受MYB、bHLH、WD40三類轉(zhuǎn)錄因子及其轉(zhuǎn)錄復(fù)合物的調(diào)控。甘藍(lán)是一種重要的十字花科蔬菜植物,常見有紫球甘藍(lán)和綠球甘藍(lán)兩種類型,紫球甘藍(lán)能自然積累花青素而綠球甘藍(lán)一般在缺肥、低溫等逆境條件脅迫下會(huì)大量積累花青素。bHLH、WD40轉(zhuǎn)錄因子在大量的植物中被認(rèn)為參與了包括花青素的生物合成以及種子種皮色素積累,而這兩個(gè)轉(zhuǎn)錄因子在綠球甘藍(lán)中如何調(diào)控花青素合成的機(jī)制研究較少。另外,針對bHLH、WD40轉(zhuǎn)錄因子是否影響植物開花時(shí)間的研究尚未見報(bào)道。本試驗(yàn)將甘藍(lán)中WD40及TT8轉(zhuǎn)錄因子融合到EAR基序抑制域（SRDX）,構(gòu)建pCABarTT8ER、pCABarWD40ER、pCABarTT8-WD40ER表達(dá)載體轉(zhuǎn)化甘藍(lán),研究了甘藍(lán)TT8、WD40轉(zhuǎn)錄因子在植株中花青素積累以及開花調(diào)控途徑中的功能。本試驗(yàn)中獲得的主要結(jié)果如下:1、pCABarTT8ER、pCABar WD40ER、pCABarTT8-WD40ER轉(zhuǎn)基因甘藍(lán)植株的獲得通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法分別將植物表達(dá)載體pCABarTT8ER... 

【文章來源】：西南大學(xué)重慶市 211工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

花青素合成途徑Fig.1-1Thepathwayofanthocyaninsynthesis

第 1 章 文獻(xiàn)綜述GA 途徑與自主途徑則需要內(nèi)在因子的參與[89]。這些調(diào)控途徑不是孤立的，而是通過外在環(huán)境條件與植物內(nèi)在生理?xiàng)l件的變化，控制這些開花途徑共同調(diào)控的整合因子的表達(dá)，激活或者抑制其下游開花相關(guān)結(jié)構(gòu)基因的表達(dá)，從而讓植物適應(yīng)外在條件和自身?xiàng)l件的變化，最大程度來優(yōu)化植株生長與發(fā)育的需求。通過這些途徑最后都匯集到相同的下游基因表達(dá)（如 SOC1、LFY、FT 等），從而促進(jìn)植物開花。在擬南芥中各開花途徑的相關(guān)結(jié)構(gòu)基因的關(guān)系如圖 1-2 所示[90]。

研究 TT8 及 WD40 轉(zhuǎn)錄因子對甘藍(lán)種皮顏色、葉片顏色及非生物脅迫下花青素積累的影響，進(jìn)一步探究其對花青素合成途徑中相關(guān)結(jié)構(gòu)基因的表達(dá)。此外也深入分析了 TT8 及 WD40 基因在甘藍(lán)開花時(shí)間中發(fā)揮的作用。此研究有利于進(jìn)一步了解TT8及WD40基因在花色素積累中的分子機(jī)理，對甘藍(lán)育種工作具有重要意義。2.2 研究思路與技術(shù)路線此試驗(yàn)的研究思路主要是通過 TT8、WD40 轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合嵌合抑制沉默技術(shù)（CRES-T）構(gòu)建植物表達(dá)載體，通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化甘藍(lán)自交不親和材料。對獲得的三種轉(zhuǎn)基因植株分別進(jìn)行表型觀察，進(jìn)一步對葉片中與花青素合成相關(guān)結(jié)構(gòu)基因進(jìn)行定量表達(dá)分析，對 TT8-WD40ER 轉(zhuǎn)基因植株的種子進(jìn)行表型觀察并進(jìn)行與花青素積累相關(guān)結(jié)構(gòu)基因的定量表達(dá)分析。此外對 TT8-WD40ER T1代植株進(jìn)行底磷、低溫脅迫處理至與對照有表型差異后進(jìn)行進(jìn)一步的與花青素代謝相關(guān)結(jié)構(gòu)基因的定量表達(dá)分析。在發(fā)現(xiàn) TT8、WD40 雙顯性抑制后導(dǎo)致甘藍(lán)早花現(xiàn)象后，進(jìn)一步分別針對 TT8ER、WD40ER、TT8-WD40ER 轉(zhuǎn)基因植株進(jìn)行了與甘藍(lán)開花早晚相關(guān)結(jié)構(gòu)基因的定量分析。具體技術(shù)路線如圖所示。

【參考文獻(xiàn)】：
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本文編號：3317778