花生是世界范圍內重要的油料與經濟作物之一。在花生的脂肪酸組成中,油酸和亞油酸約占總脂肪酸的80%,其中油酸的氧化穩(wěn)定性是亞油酸的10倍,高油酸花生及其產品具有更長的貨架期。油酸和亞油酸的比值（O/L）是評定花生油品質的重要指標。但是,不管是普通花生品種還是高油酸花生品種,同一品種其成熟度不同,O/L也具有顯著差異。AhFAD2是催化油酸生成亞油酸的關鍵酶,其表達調控決定了植物中油酸和亞油酸的比例,在生產上具有重要意義。在花生高油酸育種過程中,我們獲得了4種穩(wěn)定的FAD2A和FAD2B基因型（AABB,aaBB,AAbb和aabb）的花生材料�？紤]到AhFAD2A和AhFAD2B可能對其他FAD2成員表達的影響,利用這4種基因型花生為材料,研究了FAD2基因家族在不同成熟度影響種子油酸積累中的作用。本實驗主要研究結果如下:1.根據(jù)中果皮顏色和厚度,將花生莢果發(fā)育分為4個時期,即白色厚皮期（S1）,白色薄皮期（S2）,棕斑薄皮期（S3）,黑斑薄皮期（S4）,并利用氣相色譜法對不同基因型不同發(fā)育時期種子的脂肪酸進行測定,結果表明,不論在何種基因型中,隨著成熟度的增加,油酸含量升高,亞油酸含量... 

【文章來源】：山東師范大學山東省

【文章頁數(shù)】：79 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

脂肪酸合成途徑Figure1-1FattyacidsynthesispathwayACCase：乙酰輔酶A羧化酶；FAD2：油酸脫氫酶；FAD3：亞油酸脫氫酶；;FAS：脂肪酸合酶復合體；FAE：脂肪酸碳鏈延長酶；FAT：脂酰-�；d體蛋白硫酯酶；LACS:長鏈�；o酶A合成酶；KASⅡ：β酮脂

山東師范大學碩士學位論文4圖1-2不飽和脂肪酸的合成途徑[11]Figure1-2Thebiosyntheticpathwayofunsaturatedfattyacid1.1.3種子中脂肪酸的調控脂肪酸的合成反應發(fā)生在質體中，而TAG分子的組裝發(fā)生在質體之外，并且可能與內質網（ER）有關[4,12,13]。在大多數(shù)種子中，碳是通過糖酵解以己糖或三糖作為進入質體的主要糖類來參與FA合成的。然而，綠色種子也可以用光供應NADPH和ATP，這種替代途徑可以繞過糖酵解通過核酮糖1,5-二磷酸羧化酶和戊糖磷酸酶來實現(xiàn)。該途徑具有更高的碳效率，從而可將20%的乙酰-CoA用于油脂合成，而且也不需要從氧化戊糖磷酸途徑提供還原劑[14]。種子中脂肪酸的鏈長（最多18個碳）和飽和程度是由質體FA合成途徑決定的。乙酰輔酶A羧化酶（AcetylCoAcarboxylase，ACCase）是該途徑中第一個關鍵酶。ACCase受磷酸化，氧化還原狀態(tài)和PII相互作用的調控[15]，同時也

山東師范大學碩士學位論文28圖2-2FAD2promoter：GUS載體構建Figure2-2ConstructionofFAD2promoter:GUSvector2.2.19農桿菌感受態(tài)細胞的制備（1）取農桿菌GV3101或LBA4404菌株，在加入抗生素（Rif+）YEP的平板上劃線，放置于28°C中倒置培養(yǎng)36-48h。（2）從培養(yǎng)好的平板中挑取單克隆于50mLYEP（Rif+）溶液中，放置于28°C，220rpm搖床中避光培養(yǎng)48h。（3）取40mL菌液置于1L的大三角瓶中，加入400mL含抗生素（Rif+）的YEP溶液擴大培養(yǎng)3-4h。（4）當擴大培養(yǎng)的菌液OD值為0.5-1時，將菌液冰浴15min，然后分裝到預冷的離心管中，（4°C，4000rpm，10min）條件下離心。（5）棄上清，每個離心管中分別加入預冷的無菌水，配平，重懸，（4°C，4000rpm，10min）條件下離心。（6）棄上清，每個離心管中分別加入等體積10%的甘油，重懸后（4°C，4000rpm，10min）條件下離心。（7）棄上清，吸盡沉淀表面的溶液，再加入1mL10%甘油懸浮沉淀，合為一管，以50μL分裝到1.5mL的Ep管中，放置于-80°C保存。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]花生FAD2基因家族表達分析及其對低溫脅迫的響應[J]. 薛曉夢,李建國,白冬梅,晏立英,萬麗云,康彥平,淮東欣,雷永,廖伯壽.  作物學報. 2019(10)
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