犬新孢子蟲（Neospora caninum）,簡稱新孢子蟲,是一種寄生于細胞內(nèi)的原蟲,其能夠引起中間宿主牛、羊等動物生殖障礙等疾病和終末宿主犬及犬科動物神經(jīng)系統(tǒng)紊亂等疾病。新孢子蟲感染呈世界性流行,每年給世界養(yǎng)牛業(yè)造成嚴重的經(jīng)濟損失。目前為止,市面上沒有預防和治療新孢子蟲病的商品化疫苗和特效藥,主要原因是人們對宿主與新孢子蟲感染之間的免疫機制仍不清楚。近年來在宿主與新孢子蟲感染之間的先天免疫機制研究上取得一定的成果。先天免疫系統(tǒng)通過宿主細胞表達的模式識別受體（PRR）識別入侵微生物的病原相關分子模式（PAMP）,隨后介導機體發(fā)生先天免疫防御反應,如通過炎性反應釋放細胞因子和趨化因子等過程對入侵的病原快速識別和清除。本實驗室前期研究發(fā)現(xiàn)新孢子蟲感染腹腔巨噬細胞顯著上調(diào)NOD樣受體中NLRP3基因,并激活NLRP3炎癥小體來發(fā)揮抗新孢子蟲的作用。NLRP3炎癥小體激活能夠分泌細胞因子IL-1β和IL-18,并介導其釋放到細胞外以發(fā)揮下游的免疫效應,但新孢子蟲感染是如何誘導腹腔巨噬細胞中NLRP3炎癥小體活化并不清楚。新孢子蟲感染犬中性粒細胞能夠誘導活性氧（ROS）依賴的胞外陷阱產(chǎn)生,因此... 

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【學位級別】：碩士

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多功能熒光酶標儀檢測ROS的釋放Figure1.1TheROSreleasewasdetectedbymultifunctionalmicroplatereader

第二篇研究內(nèi)容第1章新孢子蟲誘導腹腔巨噬細胞中ROS產(chǎn)生211.3.1.2流式細胞儀檢測腹腔巨噬細胞中ROS的釋放我們通過流式細胞儀進一步檢測新孢子蟲感染小鼠腹腔巨噬細胞對細胞內(nèi)ROS水平變化的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)同多功能熒光酶標儀檢測結(jié)果一致，新孢子蟲感染小鼠腹腔巨噬細胞能夠誘導ROS釋放增加，并且發(fā)現(xiàn)新孢子蟲的感染量增加，ROS的釋放隨感染量呈依賴性增加。通過ROS抑制劑NAC預處理1h，發(fā)現(xiàn)新孢子蟲誘導腹腔巨噬細胞釋放的ROS也降低，結(jié)果如圖1.2。圖1.2流式細胞儀檢測ROS的釋放A.流式細胞儀檢測ROS；B.平均熒光強度分析ROS水平Figure1.2TheROSreleasewasanalyzedusinganFACSAriaflowcytometerA.ROSwereexaminedbywayofFACS;B.ROSwerequantifiedbywayofmeanfluorescenceintensity1.4討論本研究所使用的宿主細胞為小鼠腹腔巨噬細胞，因為腹腔巨噬細胞多存在于腹腔灌洗液中，其獲取途徑簡單便捷，每次可大量收集，且收集的細胞純度高，目前涉及免疫應答機制的研究大部分使用的都是腹腔巨噬細胞。本實驗室前期研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)新孢子蟲感染犬中性粒細胞能夠釋放胞外陷阱（NET），并且新孢子蟲誘導胞外陷阱的釋放依賴于ROS的產(chǎn)生[8]。另外，也發(fā)現(xiàn)新孢子蟲感染小鼠腹腔巨噬細胞能夠誘發(fā)先天免疫應答，激活NLRP3炎癥小體[4]，但是新孢子蟲作為胞內(nèi)病原體是通過何種分子效應來活化NLRP3炎癥小體，目前并未有相關報道需要進一步研究。因此本研究探究是否新孢子蟲誘導小鼠腹腔巨噬細胞

第二篇研究內(nèi)容第2章ROS介導新孢子蟲感染巨噬細胞誘導的NLRP3炎癥小體調(diào)控胞內(nèi)蟲體增殖34圖2.1ROS抑制劑NAC對NLRP3炎癥小體及胞內(nèi)蟲體增殖的影響A.乳酸脫氫酶（LDH）的檢測；B.WesternBolt檢測IL-1β分泌及NLRP3表達；C.ELISA檢測細胞上清中的IL-1β；D.腹腔巨噬細胞中新孢子蟲的感染率；E.熒光定量PCR檢測胞內(nèi)荷蟲量；F.100個納蟲空泡中新孢子蟲計數(shù)Figure2.1EffectsofROSinhibitorNAConNLRP3inflammasomeactivationandparasiteburdeninN.caninumPMsA.TheLDHreleasewasmonitored；B.NLRP3expressionandIL-1βsecretionweredetectedbyWesternBlot；C.IL-1βinsupernatantswasmeasuredbyELISA；D.RateofN.caninuminfectedcellsinPMs；E.NumberofN.caninumininfectedPMswasassessedbyquantitativePCR.；F.Quantificationofparasitesin100parasitophorousvacuoles

【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
[1]淫羊藿素誘導活性氧類物質(zhì)產(chǎn)生抑制血液系統(tǒng)腫瘤作用研究[D]. 楊小菁.蘭州大學 2018



本文編號：3255028