本文關鍵詞：牛FABP3轉基因小鼠的遺傳檢測及功能驗證，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：FABP3基因是影響牛肌內脂肪沉積的重要基因,與大理石花紋、背膘厚、剪切力等指標具有較高的相關性,因此,將該基因轉入小鼠體內,研究牛FABP3基因在小鼠體內遺傳和表達特性,明確該基因功能,對培育優(yōu)質高產(chǎn)轉基因肉牛新品種具有重要意義。本研究主要將牛FABP3基因轉入小鼠體內,并檢測了目的基因FABP3在轉基因小鼠及其子代小鼠體內的遺傳情況;同時,利用熒光定量和組織原位雜交技術驗證小鼠不同組織中牛FABP3基因表達水平,以及轉基因小鼠在營養(yǎng)調控下的脂肪代謝相關血液生化指標差異,以期探明轉牛FABP3基因小鼠的遺傳與表達水平,為牛FABP3基因功能研究奠定基礎,也為牛的分子遺傳育種提供理論依據(jù)。本研究取得結果如下:(1)通過活體熒光鑒定和RT-PCR檢測,結果表明前期獲得4只G0轉基因小鼠(2雌2雄)為陽性轉基因個體,可以用于后續(xù)的遺傳檢測和基因功能研究。(2)對4只G0代陽性個體制定4組交配方案并獲得G1代子鼠,對G1子鼠進行PCR擴增檢測和測序及Blast比對,結果表明陽性個體擴增片段均包含EGFP報告基因和牛FABP3目的基因;G1代子鼠平均陽性率為67.8%,且不同組間陽性率存在差異,其中組1陽性率最高為100%。(3)對G1代轉基因陽性率為100%的組1內個體進行隨機交配并傳代至G4代,通過PCR擴增檢測和測序及Blast比對發(fā)現(xiàn),G2代子鼠平均陽性率為100%,G3代為33.3%,G4代為18.75明,G0代轉基因陽性小鼠可將目的基因遺傳給后代,但隨著代次的增加,目的基因在后代個體中比例呈下降。(4)利用實時熒光定量PCR技術,在mRNA水平對牛FABP3基因在G0代和G1代小鼠心臟、肝臟、腎臟、骨骼肌組織的表達情況進行了檢測和表達量分析。結果表明轉基因小鼠心肌和骨骼肌中總FABP3表達量顯著高于非轉基因個體(P0.05)。(5)利用Western Blot、對G0、G1、G2、G3代陽性轉基因小鼠心肌和骨骼肌中FABP3蛋白以及GFP蛋白的表達情況進行了檢測,結果表明陽性轉基因小鼠中FABP3基因的表達量相對野生型個體有所增加,GFP蛋白可以在小鼠的心臟和骨骼肌中得到表達。(6)對G1代轉基因小鼠進行飼養(yǎng)試驗,即在高油營養(yǎng)水平對牛FABP3基因功能的驗證。結果表明高油日糧組轉基因小鼠和非轉基因小鼠體重差異不顯著(P0.05),普通日糧組轉基因小鼠與非轉基因小鼠體重差異不顯著(P0.05),轉基因高油日糧小鼠與非轉基因日糧小鼠差異顯著(P0.05)。通過血液生化指標檢測,轉基因高油日糧小鼠膽固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、肌酐等含量均略高于野生型普通日糧個體。(7)對轉基因小鼠G0、G1代個體進行了組織原位表達檢測,在G0代個體中表達量較高,G1代個體中能看到綠色熒光,但略有降低。結果也表明GFP蛋白可以在小鼠體內表達,并能夠在遺傳中傳遞給下一代。這與蛋白質免疫印跡中GFP檢測結果相一致。(8)通過基因捕獲技術,分析外源基因在小鼠基因組中的整合位點,結果檢測到2只轉基因小鼠的外源基因插入位點分別位于9號和12號染色體上,且存在重復序列。
【關鍵詞】：轉基因小鼠 FABP3基因 肌內脂肪 遺傳檢測 牛
【學位授予單位】：中國農業(yè)科學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：S823;Q78
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-12
• 英文縮略表12-13
• 第一章 文獻綜述13-19
• 1.1 引言13
• 1.2 轉基因小鼠研究進展13-14
• 1.3 轉基因動物存在問題14-15
• 1.4 FABP3研究進展15-16
• 1.4.1 FABP3基因的生物學功能15
• 1.4.2 FABP3在家畜育種中的研究15-16
• 1.5 營養(yǎng)調控與基因調控的互作16-17
• 1.6 研究的目的和意義17-18
• 1.7 技術路線18-19
• 第二章 FABP3轉基因小鼠各世代DNA水平陽性鑒定19-27
• 2.1 試驗材料19-20
• 2.1.1 試驗動物及設計19
• 2.1.2 主要試劑19-20
• 2.1.3 試驗儀器設備20
• 2.2 試驗方法20-21
• 2.2.1 小鼠尾組織基因組DNA提取20-21
• 2.2.2 PCR引物合成及片段擴增21
• 2.3 結果21-26
• 2.3.1 G0代轉基因小鼠陽性檢測21-22
• 2.3.2 G1代轉基因小鼠陽性檢測22-24
• 2.3.3 測序結果24-25
• 2.3.4 后代測定25-26
• 2.4 討論26
• 2.5 小結26-27
• 第三章 轉基因小鼠FABP3 RNA和蛋白水平表達27-35
• 3.1 試驗材料27-28
• 3.1.1 試驗動物27
• 3.1.2 試驗試劑27
• 3.1.3 試劑配置27-28
• 3.1.4 試驗儀器設備28
• 3.2 試驗方法28-30
• 3.2.1 總RNA提取及熒光定量操作28-30
• 3.2.2 蛋白提取及Western Blot操作步驟30
• 3.3 結果30-33
• 3.3.1 轉基因子代小鼠mRNA表達差異30-32
• 3.3.2 Western Blot檢測轉基因小鼠蛋白重組表達32-33
• 3.4 討論33-34
• 3.5 小結34-35
• 第四章 轉基因小鼠脂肪代謝生化指標及原位表達檢測35-41
• 4.1 試驗材料35-36
• 4.1.1 試驗動物及飼養(yǎng)35-36
• 4.1.2 試驗試劑及材料36
• 4.1.3 試驗儀器設備36
• 4.2 試驗方法36-37
• 4.2.1 體重及血液指標檢測36-37
• 4.2.2 切片制做37
• 4.3 結果37-39
• 4.3.1 轉基因小鼠飼養(yǎng)結果37-38
• 4.3.2 組織切片結果38-39
• 4.4 討論39-40
• 4.5 小結40-41
• 第五章 牛FABP3在轉基因小鼠上的插入位點41-44
• 5.1 試驗材料41-42
• 5.1.1 基因捕獲原理41
• 5.1.2 材料和方法41-42
• 5.2 結果42
• 5.3 討論42-43
• 5.4 小結43-44
• 第六章 結論44-45
• 6.1 主要結論44
• 6.2 下一步工作44-45
• 參考文獻45-52
• 致謝52-53
• 作者簡歷53

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前8條

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  本文關鍵詞：牛FABP3轉基因小鼠的遺傳檢測及功能驗證，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：320842